[发明专利]一种调节肝细胞增殖的基因Tcaim的siRNA及其应用

说明书

本发明公开了一种调节肝细胞增殖的新基因Tcaim的siRNA及其应用，属于基因工程及基因治疗技术领域。本发明的技术方案要点为：一种调节肝细胞增殖的新基因Tcaim的siRNA，该siRNA的靶基因序列如序列表中SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。本发明采用分子生物学手段，首次确证基因Tcaim与肝细胞增殖有显著相关性，并通过筛查siRNA，筛选得到特异性的针对基因Tcaim的干扰靶点，应用MTT、EdU、qRT‑PCR、Western‑blot技术分析该siRNA干扰靶点对大鼠肝细胞BRL‑3A增殖的影响，结果表明应用siRNA针对该靶点可以有效地抑制大鼠肝细胞BRL‑3A增殖，能够进一步用于制备预防或治疗肝病的药物。

技术领域

本发明属于基因工程及细胞工程领域，具体涉及一种调节肝细胞增殖的新基因Tcaim的siRNA及其应用。

背景技术

肝脏是动物体内重要的代谢器官和最大的消化腺，结构复杂并且功能多样，对生命的维持具有重要意义。肝脏具有非常强的再生能力，肝再生的机理十分复杂，由多种类型的肝脏细胞高度协调、涉及多种细胞因子和生长因子、多种信号通路参与且受机体精密调控的动态过程。研究肝再生和肝细胞增殖相关基因，对建立治疗和预防肝病方法、开发预防和治疗肝病药物具有重大理论意义和临床应用价值。研究已表明，RNAi技术能特异性地向哺乳动物细胞中导入siRNA，能降低靶基因的表达，进而造成靶蛋白的表达下降，达到高效特异性的基因治疗作用。

Tcaim基因全长为31224bp，含11个外显子，其外显子分别位于该基因的1-198，3130-3199，9402-9558，14683-14935，19860-19982，22388-22485，22871-22962，26968-27200，28515-28646，29681-31224 bp处，其mRNA全长为1789bp ，共编码505个氨基酸，其保守结构域是pfam14687（DUF4460）和pfam14688（DUF4461），是个未知功能的结构域，该结构域家族存在于真核生物中，通常长度为103-119个氨基酸。存在保守的HPD序列基序。有两个完全保守的残基（N和F）可能在功能上很重要。然而，在大鼠体内，Tcaim还是一个功能不详的基因，能否促进体外培养的大鼠肝细胞增殖尚不明确。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供了一种调节肝细胞增殖的新基因Tcaim的siRNA及其应用。

本发明采用以下技术方案来解决上述技术问题，一种调节肝细胞增殖的新基因Tcaim的siRNA，其特征在于该siRNA的靶基因序列如序列表中SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

本发明所述的调节肝细胞增殖的新基因Tcaim的siRNA，其特征在于该siRNA为以下双链RNA分子中的任意一种：

正义链：5’-AAACCAACUCAGCUUACAUdTdT-3’，

反义链：3’-dTdTUUUGGUUGAGUCGAAUGUA-5’；

正义链：5’-UUGAACACGUCCAAAGCUUdTdT-3’，

反义链：3’-dTdTAACUUGUGCAGGUUUCGAA-5’；

正义链：5’-ACAUAGUCUUAGCCGCCUAdTdT-3’，

反义链：3’-dTdTUGUAUCAGAAUCGGCGGAU-5’。