[发明专利]一种针对沙门氏菌的核酸快速检测方法

说明书

本发明涉及核酸检测领域，具体是一种针对沙门氏菌的核酸快速检测方法，步骤如下：1)引物稀释；2)扩增反应；3)将反应液混匀后，放入定量PCR仪，设置65℃、30s一个循环，60个循环，循环完成后加溶解曲线分析；4)根据所获得扩增曲线和溶解曲线判定，阴性对照组的检测结果是阴性结果，则本次实验有效，否则本次实验无效。本发明具有高特异性、高灵敏度以及操作简单的优点；使用一个反应管即可检测出样本是否感染了沙门氏菌，实现了实时监控过程，并且可以针对扩增产物做溶解曲线分析，针对产物进行特异性的分析。

技术领域

本发明涉及核酸检测领域，具体是一种针对沙门氏菌的核酸快速检测方法。

背景技术

沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一，其病原沙门氏菌，属肠道细菌科，包括引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。沙门氏菌病属于畜禽常见病，发病率较高，危害大，能使人和各种畜禽致病。主要通过污染食品和水源经口传播，人畜感染后可呈无症状带菌状态，也可表现为有临床症状的致死疾，它可能加重病态或死亡率，畜禽感染沙门氏菌可引起相应的传染病，例如猪霍乱、鸡白痢等，降低动物的繁殖生产力，甚至导致死亡。

沙门氏菌属(Salmonella)是一大群形态、生化性状及抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌。1885年沙门氏等在霍乱流行时分离到猪霍乱沙门氏菌，故定名为沙门氏菌属。已发现的近一千种(或菌株)，菌体大小(0.6～0.9)×(1～3)微米，无芽胞，一般无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外，大多有周身鞭毛，需氧或兼性厌氧。沙门氏菌按生化反应和DNA同源性分为2个种(肠道沙门菌、邦戈沙门菌)和4个亚属。亚属Ⅰ是生化反应典型的和最常见的沙门氏菌；亚属Ⅱ和Ⅳ是生化反应不典型的沙门氏菌；亚属Ⅲ是亚利桑那沙门氏菌。具有复杂的抗原结构，一般可分为菌体(O)抗原、鞭毛(H)抗原和表面(Vi)抗原3种。

根据中华人民共和国卫生部制定《人间传染的病原微生物名录》该菌危害程度为第三类，危害人民健康及养殖生产。利用新型病原学检测技术，建立快速检测方法用于沙门氏菌快速鉴定是有效、精准防控疫情的技术关键。因此，针对以上现状，迫切需要开发一种针对沙门氏菌的核酸快速检测方法，以克服当前实际应用中的不足。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于核酸的快速、准确、灵敏的方法检测人畜是否感染沙门氏菌的引物组，以及应用上述引物组的核酸快速检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种针对沙门氏菌的核酸快速检测方法，检测是否感染沙门氏菌的快速扩增引物组，引物组包括引物1和2、引物3和4、引物5和6；

引物1：ATGATCTGAGGCAAGTTGCGTTGTGAGCCATTCGTTAATGTC

引物2：GCAGAATTTGCGGATCGTTGGCACCTTCATCCATCGTTAC

引物3：CCTCAGCTCAATCATAACTCA

引物4：ATAACTGGTATTATGGCTGCC

引物5：CGTCATTGTTACCGTAATGCG

引物6：AGTTCAGTGCAAGCATGCA

沙门氏菌检测实验，包含以下实验材料：

a)引物组：引物1和2、引物3和4、引物5和6干粉，各10D；

b)反应浓缩液；

c)沙门氏菌菌液：沙门氏菌攻毒实验的鸡肾、肺、肝组织；

d)阳性对照为沙门氏菌DNA样本，阴性对照为不含目的基因的反应液；

运用本发明核酸检测方法检测沙门氏菌的步骤如下：