[发明专利]甘蔗副产物饲料专用发酵菌剂及其制备方法

权利要求书

1.甘蔗副产物饲料专用发酵菌剂，其特征在于：包括以下重量份数的原料：驯化菌冻干粉15～30份，产朊假丝酵母冻干粉8～10份，植物乳杆菌冻干粉6～8份，枯草芽孢杆菌冻干粉8～10份，黑曲霉冻干粉4～6份，米曲霉冻干粉4～6份，绿色木霉冻干粉7～10份，纤维素酶冻干粉18～20份；

所述的驯化菌冻干粉的制备方法为：取二次驯化菌扩大培养时达到稳定期的菌液，离心，取菌泥用无菌磷酸盐缓冲液洗涤，离心再重悬于无菌磷酸盐缓冲液，加入包埋剂，进行真空冷冻干燥，即得驯化菌冻干粉剂；

所述的产朊假丝酵母冻干粉的制备方法为：将产朊假丝酵母接种于麦芽汁培养基中，于36～38℃、pH6.3～6.5条件下培养至稳定期，取菌液进行离心，弃去上清液，取菌泥用无菌磷酸盐缓冲液洗涤，离心再重悬于无菌磷酸盐缓冲液，加入包埋剂，进行真空冷冻干燥，即得产朊假丝酵母冻干粉剂；

所述的植物乳杆菌冻干粉的制备方法为：将植物乳杆菌接种于MRS培养基，于36～38℃、pH6.3～6.5条件下培养至稳定期，取菌液进行离心，弃去上清液，取菌泥用无菌磷酸盐缓冲液洗涤，离心再重悬于无菌磷酸盐缓冲液，加入包埋剂，进行真空冷冻干燥，即得植物乳杆菌冻干粉剂；

所述的枯草芽孢杆菌冻干粉、黑曲霉冻干粉、米曲霉冻干粉、绿色木霉冻干粉、纤维素酶冻干粉的制备方法为：将各菌分部接种于PCA液体培养基，于36～38℃、pH6.8～7.2条件下培养至稳定期，取菌液进行离心，弃去上清液，取菌泥用无菌磷酸盐缓冲液洗涤，离心再重悬于无菌磷酸盐缓冲液，加入包埋剂，进行真空冷冻干燥，即分别得到枯草芽孢杆菌冻干粉、黑曲霉冻干粉、米曲霉冻干粉、绿色木霉冻干粉、纤维素酶冻干粉。

2.根据权利要求1所述的甘蔗副产物饲料专用发酵菌剂，其特征在于：所述的包埋剂由以下重量份数的原料制成：麦芽糊精8～10份，β-环糊精6～8份，淀粉10～12份，水8～20份。

3.根据权利要求1所述的甘蔗副产物饲料专用发酵菌剂，其特征在于：所述驯化菌的驯化方法包括以下步骤：

（1）选取菌泥：选取半年以上甘蔗地土壤或甘蔗叶堆沤泥，或者糖厂甘蔗渣堆放区堆放半年以上形成的污泥，即得原始菌泥，将原始菌泥现场封存在无菌玻璃瓶内，带回实验室作为原始菌群进行培养；

（2）一次驯化：取新鲜的甘蔗尾梢粉碎至100～200目，于121℃高压灭菌10～20min，冷却后加入到配制好的基础培养基混合均匀，甘蔗尾梢与基础培养基的重量比为1.0～1.5:1，即得一次驯化培养基；

根据甘蔗尾梢加入量的不同，设置5～6个梯度，制备几种甘蔗尾梢含量不同的一次驯化培养基，将步骤（1）中的原始菌泥接种到各培养基中，35～40℃、pH6.3～6.5条件下培养20～30天，每隔2～4天记录一次培养基中的情况，以甘蔗尾稍分解的百分率最多为优，以菌液澄清、菌泥不发臭为优，综合各个培养基中的情况，选择最优的一组培养基，其菌液中存活的菌即为一次驯化菌；

（3）二次驯化：取新鲜的甘蔗尾梢粉碎至100～200目，于121℃高压灭菌10～20min，得A料；取榨汁之后的甘蔗渣粉碎至100～200目，于121℃高压灭菌10～20min，得B料；取糖厂中甘蔗渣喷淋水形成的污水，虑去杂物，得C料；

将上述A、B、C料分别进行两两组合或者三者组合，加入到基础培养基，制成多个二次驯化培养基，分别接种步骤（2）中一次驯化菌的菌液，于35～42℃条件下培养15～30天，每隔2～4天记录一次培养基中的情况，以甘蔗尾稍、甘蔗渣分解的百分率最多为优，以污水澄清、不发臭为优，综合各个培养基中的情况，选择最优的一组培养基，其菌液即为二次驯化菌；

（4）扩大培养：取步骤（3）得到的二次驯化菌的菌液进行扩大培养，培养基为二次驯化培养基最优情况时的培养基，培养40～50h；

（5）分装，保藏，即得驯化菌种子液，可将驯化菌种子液进行继续扩大培养，形成大量的优势菌种，以适应工业化生产。