[发明专利]一种HPLC-APCI/MS检测母乳中rac-OPL对映异构体的方法

权利要求书

1.一种HPLC-APCI/MS检测母乳中1-油酸-2-棕榈酸-3-亚油酸甘油酯对映异构体的方法：其特征在于能够有效分离1-油酸-2-棕榈酸-3-亚油酸甘油酯(rac-OPL)的对映异构体rac-OPL1和rac-OPL2；突破了母乳中甘油三酯检测的瓶颈.该方法按照以下步骤进行：

1）脂质提取：取母乳2ml，用Folch法提取总脂，提取液旋蒸至干，然后用正己烷溶解，过0.22μm有机相滤膜备用；2）一维色谱：目标OPL的靶向收集.将样品0.5 mg/ml的脂肪样品注入到连有C18色谱柱的液相色谱-三重四极杆质谱联用仪中，进样体积为5μl，并用ESI MS/MS技术确定明确OPL的保留时间.然后将10mg/ml脂肪样品注入到连有C18色谱柱的液相色谱中，进样体积为20μl，利用自动收集器对目标甘油三酯分子进行靶向收集，并用氮气吹干备用，并用正己烷重新溶解至50μl备用;3）二维色谱：目标TAG 位置异构体的检测，

利用手性色谱柱，配合具有APCI-MS的高效液相色谱质谱联用仪对一维色谱中收集的OPL进行检测. 质谱条件为：APCI离子源，阳离子模式，fragmentor：70V，扫描范围：350~1200；4）rac-OPL1和rac-OPL2的相对含量根据从母乳样品的总离子流图提取的rac-OPL1和rac-OPL2色谱峰的峰面积计算获得。

2.根据权利要求1所述的方法其特征在于利用二维色谱技术和APCI/MS，有效排除样品中其他甘油三酯分子的干扰，rac-OPL的对映异构体的分离效果达到最佳。

3.根据权利要求1-2所术的方法，从母乳样品中的总离子流图中提取rac-OPL1和rac-OPL2的色谱峰进行相对含量的计算，能够有效提高对映异构体定量的准确性。

4.根据权利要求1-3所术的方法从母乳样品中的总离子流图中提取rac-OPL1和rac-OPL2的色谱峰所用的质荷比M/Z 为857.5。

5.根据权利要求1-4所述的方法，其特征在于，利用C18反相色谱有效靶向收集OPL：

色谱柱为Zorbax Eclipse Plus C18(5µm, 250 mm×4.6 mm, AgilentTechnologies,USA)，液相洗脱条件见表1.

表1 C18非水相液相色谱流动相梯度洗脱条件。

6.根据权利要求1-5所述的方法，其特征在于能够利用手性色谱有效分离rac-OPL1和rac-OPL2.手性色谱柱为Lux Cellulose-1(3 μm,250 mm × 4.6 mm, Phenomenex,Torrance, CA, U.S.A.), 液相洗脱条件为：：0-180 min 90%A+10%B, A 为正己烷, B 为正己烷:异丙醇 (99:1, v/v)，流速为0.5ml/min。

7.根据权利要求1-6所述的方法，检测母乳中rac-OPL的两种对映异构体rac-OPL1和rac-OPL2。