[发明专利]一种烟草抗肿瘤活性组分的提取方法及其应用

权利要求书

1.一种烟草抗肿瘤活性组分的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)预处理：对烟草原料进行烘干处理，以及将烘干处理后的烟草原料进行超微粉碎处理，得到烟草超微粉；

(2)常温水提：在烟草超微粉中加入提取溶剂，在常温条件下进行提取操作；对提取操作后的烟草超微粉进行离心处理，并收集离心处理后的沉淀物；步骤(2)中的提取溶剂为纯化水；

(3)高温水提：在步骤(2)中收集的沉淀物中加入提取溶剂，在90-100℃的提取温度下进行浓缩提取操作；对浓缩提取操作后得到的浓缩提取液进行降温处理、离心处理，并收集离心处理后的沉淀物；步骤(3)中的提取溶剂为纯化水；

(4)甲醇提取：在步骤(3)中得到的沉淀物中加入提取溶剂，在0-4℃的提取温度下进行浸提提取操作，对浸渍提取物进行离心处理，并收集离心处理后的上清，将收集的上清进行旋转蒸发浓缩烘干处理；步骤(4)中的提取溶剂为85-100％的甲醇；

(5)丙酮提取：在步骤(4)中得到的沉淀物中加入提取溶剂，在0-4℃的提取温度下进行浸提提取操作，对浸渍提取物进行离心处理，并收集离心处理后的上清，将收集的上清进行旋转蒸发浓缩烘干处理，得到烟草活性组分；步骤(5)中的提取溶剂为85-100％的丙酮；

(6)烟草活性组分分离：在步骤(5)中得到的上清液进行浓缩烘干处理，配制样品制备液相进行分离，分离得到的组分进行活性筛选，具有活性的组分再进一步分离；

(7)在步骤(6)中得到的具有活性组分的样品，制备液相进行分离，分离得到的组分进行活性筛选，选取活性最强的组分；

(8)质谱分析：在步骤(7)中制备液相分离出来具有抗肿瘤活性的组分，质谱进样，得到其所有可能性的结构式。

2.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，

步骤(1)中的烘干处理是将烟草原料放置在烘箱中进行烘干，使得烘干处理后的烟草原料的含水量小于5％，烘干温度为50-60℃，烘制时间为4-8h；

和/或，步骤(1)中的超微粉碎处理是将烘干处理后的烟草原料，使用50-80目筛网的粉碎机进行粉碎处理，并对粉碎处理后的烟草原料，使用200-400目筛网的粉碎机进行粉碎处理，得到所述烟草超微粉。

3.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，

步骤(2)中加入提取溶剂的质量是所述烟草超微粉的质量的2-4倍；

和/或，步骤(2)中的提取操作是指将所述烟草超微粉和提取溶剂置于提取罐中，提取时间为0.5-3h；

和/或，步骤(2)中的离心处理是指：离心温度为8-12℃，离心时间为0.5-1.5h，转速为3000-6000rpm/min。

4.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，

步骤(3)中加入提取溶剂的质量是沉淀物的质量的1.2-2.4倍；

和/或，步骤(3)中的浓缩提取操作的提取时间为0.5-1.5h；

和/或，步骤(3)中的离心处理是指将降温处理后的所述浓缩提取液置于离心瓶中，离心温度为8-12℃，离心时间为0.5-1.5h，转速为3000-6000rpm/min。

5.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，

步骤(4)中加入提取溶剂的质量是沉淀物的质量的1.5-2.5倍；

和/或，步骤(4)中的浸渍提取操作是指每隔0.5h搅拌一次，提取时间为12-24h；

和/或，步骤(4)中的离心处理是指将所述浸渍提取物置于离心瓶中，离心温度为：3-5℃，离心时间为0.5-1.5h，转速为3000-6000rpm/min；

和/或，步骤(4)中的浓缩烘干处理的温度为60-70℃。