[发明专利]一种抗尿液成分干扰的单羟酚类物质尿检试剂盒及其制备方法、操作方法和应用

说明书

本发明涉及一种抗尿液成分干扰的单羟酚类物质尿检试剂盒及其制备方法、操作方法和应用，属于生物医学检验领域。本发明的试剂盒，由主瓶(安瓿瓶)试剂和副瓶(塑料瓶)试剂构成，其中：所述主瓶试剂由汞、浓硝酸、硫酸铜和蒸馏水为原料制得，所述副瓶试剂由亚硝酸钠和蒸馏水组成。本发明的试剂盒是以汞、浓硝酸、硫酸铜和亚硝酸钠为原料，经化学反应和溶液配制而成。本发明的尿检试剂盒具有抵抗临床尿样成分物质尿素和蛋白质干扰的功能，稳定性高，且显色反应时间短，显色灵敏度高，使尿检试剂对各种临床尿样的适用程度增大，提高了尿检的有效性和客观性，可避免临床阳性样品因尿样成分尿素和蛋白质干扰的漏检。

技术领域

本发明属于生物医学检验领域，更具体地说，本发明涉及一种抗尿液成分干扰的单羟酚类物质尿检试剂盒及其制备方法、操作方法和应用。

背景技术

肿瘤早期诊断和早期治疗是提高肿瘤治愈率的关键。恶性肿瘤患者普遍存在氨基酸代谢异常的现象，即蛋白质分解为氨基酸的过程增强，而氨基酸的分解代谢则减弱，多余而无法利用的氨基酸则排出体外。氨基酸代谢异常在肿瘤发生早期就存在，其中一个重要表现是尿液中对羟基苯丙氨酸(酪氨酸)的含量升高。肿瘤细胞代谢越活跃，氨基酸代谢异常越显著，酪氨酸含量升高越明显。临床研究表明，几乎所有恶性肿瘤病人尿液中的酪氨酸含量明显升高的结果。因此，基于单羟酚类物质的尿液检测试剂在原发肿瘤的发现、肿瘤高危人群的筛选、肿瘤治疗效果的观察和评价等方面具有重要的临床参考价值。中国专利《对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂及其制备方法》(ZL 201310247724.1)、《一种恶性乳腺疾病筛查尿检试剂及其应用》(ZL 200710049244.9)中都有这方面的报道。

目前，含单羟酚类物质的尿液检测试剂的制备都是以米伦(Millon)反应原理为基础。米伦试剂是用浓硝酸与汞反应来制备，在反应中生成硝酸汞、亚硝酸汞、硝酸和少量的亚硝酸等物质。它可与含酚羟基氨基酸衍生物产生颜色反应。一般认为，米伦显色反应是由一系列较为复杂的反应构成，其中主要有汞盐参与的酚的亚硝基化反应、经互变异构后成为颜色更深的邻醌肟物质的反应和形成红色稳定含汞配合物的反应等，如下式一所示。

米伦(Millon)试剂对单羟酚类物质的检测有着很高的灵敏度，故在生物医学检测领域具有重要的应用价值。但米伦试剂在临床上的应用也存在非常明显的缺陷，这就是临床尿样成分物质中的尿素和蛋白质量均可干扰米伦反应，可以造成临床阳性尿液的漏检，而且这个问题未被人们注意到。

众所周知，尿液成分物质除了大量的水之外，主要是尿素和蛋白质，而其中的尿素可与亚硝酸反应生成氮气，消耗米伦试剂中的亚硝酸；蛋白质可与汞盐生成沉淀，而汞盐是催化和显色反应的必须物质。由于尿样的复杂性，其成分含量是波动起伏的。当尿样中尿素含量较低时，它的影响小或不影响单羟酚类物质的亚硝基化反应，显色反应基本正常或正常，可获得正确的阳性检测结果；但当尿样中尿素含量较高时，即可影响酚类物质的亚硝基化反应，使米伦反应不正常甚至不显色，造成阳性样品的漏检。同样，蛋白质含量较高时，也可因消耗汞盐而干扰米伦反应，影响催化反应和显色反应，也可以造成临床阳性尿液的漏检。

米伦试剂的制备较为繁琐和存在着污染，一般难以“现制现用”。目前主要采用尿检试剂方式，即预先制备、装入安瓿瓶保存、待临床检测时开瓶使用的方式。这样以来，除了上述尿样中干扰物质影响外，还增加了尿检试剂因制备、放置分解的新问题，即因其中的亚硝酸极不稳定，只能存在于稀溶液中，且易于分解，使试剂不稳定的问题。因此，当前临床尿检试剂存在明显的不足，因不能抵抗尿液成分物质的干扰和试剂不稳定，而造成临床阳性尿液的漏检，使尿检的临床意义大大降低。

基于上述理由，提出本申请。

发明内容