[发明专利]Numb或其上调剂在制备治疗肝纤维化、肝硬化或促进肝实质细胞再生的药物中的应用

说明书

本发明涉及Numb或其上调剂在制备治疗肝纤维化、肝硬化或促进肝实质细胞再生的药物中的应用。本发明使用RNA干扰技术诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)的Numb基因敲减/过表达后注射入肝纤维化大鼠体内观察其作用，还使用RNA干扰技术促使肝卵圆细胞(WB‑F344)的Numb基因敲减，观察细胞的变化。结果证实，Numb敲减后促进WB‑F344细胞向胆管细胞表型分化，还促进BMSCs向胆管上皮细胞分化并显著促进肝纤维化的发展；而Numb过表达则促进BMSCs向肝细胞分化，促进纤维化肝脏修复。因此，Numb基因为治疗肝纤维化、肝硬化或促进肝实质细胞再生的靶基因。

技术领域

本发明涉及分子生物学和肝病防治领域，具体地说，涉及Numb或其上调剂在制备治疗肝纤维化、肝硬化或促进肝实质细胞再生的药物中的应用。

背景技术

胆管上皮细胞的异常增殖是各种慢性肝病的主要病理特征之一，如原发性胆汁性胆管炎、原发性硬化性胆管炎、病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性肝病、药物及化学因素导致的肝损伤等。当肝细胞或胆管持续受损时，胆管上皮细胞开始增殖，通过修复胆管树或向肝细胞转分化来修复肝损伤。然而，当受到持续的慢性炎症的刺激时，胆管反应可引起胆管异常增殖(也称为“导管反应”或“反应性胆管上皮细胞”)。胆汁淤积会促进肝纤维化并最终导致肝硬化。肝祖细胞，在啮齿动物中称为卵圆细胞或在人类中称为肝干细胞，可分化成肝细胞或胆管上皮细胞。我们的研究证实肝祖细胞是胆汁淤积性肝纤维化动物模型胆管上皮细胞的主要来源，抑制肝祖细胞向胆管上皮细胞分化对于胆汁淤积性肝纤维化的治疗非常有用。然而，目前尚没有能够有效地抑制胆管上皮细胞的异常活化与增殖的药物上市。

Notch信号是进化过程中高度保守的细胞间信号转导机制，对于胚胎发育，成熟，细胞特化和维持祖细胞特征至关重要，在调节细胞命运和维持器官形态方面发挥着关键作用。Notch信号通路与胆管上皮细胞的特异性密切相关，Notch信号的异常激活将促进肝祖细胞向胆管上皮细胞的分化。Numb(蛋白质Numb同系物)，位于真核细胞的内体中，是一种重要的细胞命运决定因素，对Notch信号通路具有负调控作用。在胚胎发育中的不对称细胞分裂期间，Numb拮抗Notch活性。

在慢性肝损伤期间，Numb可能起到“开关”作用，以决定肝祖细胞在此过程中分化为胆管细胞抑或肝细胞。此外，期刊文献《临床肿瘤细胞学杂志》2010年第15卷第11期刊出的论文“肝细胞癌组织中Numb、p53蛋白的表达及其意义”，采用免疫组化SP法检测30例HCC组织及其癌旁组织、8例肝硬化组织和9例正常肝组织中的Numb蛋白的表达情况，结果癌旁组织、肝硬化组织及正常肝组织Numb蛋白阳性表达率分别为90.0％、87.5％和88.9％，在HCC组织中的阳性表达率为44.7％，明显低于癌旁组织、肝硬化组织及正常肝组织，差异有统计学意义(P＜0.05)。中南大学2009年硕士论文“Numb在原发性肝细胞癌中的表达及意义”，收集了自2001年至2005年在中南大学湘雅二医院肝胆外科行肝叶切除术的35例原发性肝细胞癌病例的病理标本和临床资料，用免疫组化实验和定量RT-PCR实验来分别检验Numb蛋白及核酸分子的表达情况，并分析其与临床病理特征(如肿瘤细胞分化、肿瘤大小、肿瘤数目、门静脉癌栓等)之间的关系，结果：1、免疫组织化学实验结果：35例原发性肝细胞癌的非癌组织中，Numb高表达的26例(74.3％)，在与其相应的癌组织中，Numb高表达的15例(42.9％)。2、定量RT-PCR实验结果：Numb的mRNA的定量在肝硬化组织和中高分化肝细胞癌组织中较高，分别为慢性肝炎组织的39.6倍和37.6倍，而在低分化肝细胞癌组织中较低，为慢性肝炎组织的1.6倍。3、临床病理评估结果：Numb的高表达与临床病理特征中的肿瘤细胞分化程度(P＝0.001)二者之间存在显著性的相关。最后得出结论：Numb在原发性肝细胞癌的非癌组织和癌组织中均有高表达，Numb的高表达与肝癌临床病理特征中的肿瘤细胞分化程度二者之间存在显著性的相关。然而，目前尚不清楚Numb基因在肝纤维化、肝硬化及促进肝实质细胞再生的治疗中的作用。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供Numb及其上调剂的新用途。