[发明专利]47个人类常染色体与Y染色体基因座的复合扩增试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种人类常染色体与Y染色体47个基因座的复合扩增试剂盒，其特征在于，包括以下47个基因座的扩增引物：19个常染色体STR基因座：D7S820、TH01、D6S1043、TPOX、Penta E、D16S539、CSF1PO、D19S433、FGA、Penta D、D8S1179、D18S51、D3S1358、vWA、D5S818、D13S317、D21S11、D2S1338、D12S391；27个Y染色体STR基因座：DYS392、DYS389I、DYS456、DYS389II、DYS19、DYS460、DYS518、DYS437、DYS576、DYS439、Y_GATA_H4、DYS533、DYS391、DYS627、DYS570、DYS635、DYS481、DYS393、DYS390、DYS448、DYS438、DYS458、DYF387S1、DYS385、DYS449；1个性别识别基因座Amelogenin；

所述扩增引物的序列如SEQ ID NO.1～94所示：其中，19对常染色体STR基因座的扩增引物的序列如下：D7S820、SEQ ID NO.1～2；TH01、SEQ ID NO.3～4；D6S1043、SEQ ID NO.5～6；TPOX、SEQ ID NO.7～8；Penta E、SEQ ID NO.9～10；D16S539、SEQ ID NO.11～12；CSF1PO、SEQ ID NO.13～14；D19S433、SEQ ID NO.15～16；FGA、SEQ ID NO.17～18；PentaD、SEQ ID NO.19～20；D8S1179、SEQ ID NO.21～22；D18S51、SEQ ID NO.23～24；D3S1358、SEQ ID NO.25～26；vWA、SEQ ID NO.27～28；D5S818、SEQ ID NO.29～30；D13S317、SEQ IDNO.31～32；D21S11、SEQ ID NO.33～34；D2S1338、SEQ ID NO.35～36；D12S391、SEQ IDNO.37～38；27对Y染色体STR基因座的扩增引物序列如下：DYS392、SEQ ID NO.39～40；DYS389I、SEQ ID NO.41～42；DYS456、SEQ ID NO.43～44；DYS389II、SEQ ID NO.45～46；DYS19、SEQ ID NO.47～48；DYS460、SEQ ID NO.49～50；DYS518、SEQ ID NO.51～52；DYS437、SEQ ID NO.53～54；DYS576、SEQ ID NO.55～56；DYS439、SEQ ID NO.57～58；Y_GATA_H4、SEQ ID NO.59～60；DYS533、SEQ ID NO.61～62；DYS391、SEQ ID NO.63～64；DYS627、SEQ ID NO.65～66；DYS570、SEQ ID NO.67～68；DYS635、SEQ ID NO.69～70；DYS481、SEQ ID NO.71～72；DYS393、SEQ ID NO.73～74；DYS390、SEQ ID NO.75～76；DYS448、SEQ ID NO.77～78；DYS438、SEQ ID NO.79～80；DYS458、SEQ ID NO.81～82；DYF387S1a、SEQ ID NO.83～84；DYF387S1b、SEQ ID NO.85～86；DYS385a、SEQ ID NO.87～88；DYS385b、SEQ ID NO.89～90；DYS449、SEQ ID NO.91～92；1对性别识别基因座的扩增引物序列如下：Amelogenin、SEQ ID NO.93～94；

将所述的47个基因座的扩增引物分为如下五组，分别用五种不同颜色的荧光染料标记五组的扩增引物，每组的扩增引物采用同一种颜色的荧光染料标记，每个基因座的一条扩增引物被荧光染料标记：第一组，DYS392、DYS389I、DYS456、DYS389II、DYS19、DYS460、DYS518、D7S820、TH01、D6S1043；第二组，DYS437、DYS576、DYS439、Y_GATA_H4、DYS533、DYS391、DYS627、TPOX、Penta E；第三组，Amelogenin、DYS570、DYS635、DYS481、DYS393、DYS390、DYS448、D16S539、CSF1PO、D19S433；第四组，DYS438、DYS458、DYF387S1、DYS385、DYS449、FGA、Penta D；第五组，D8S1179、D18S51、D3S1358、vWA、D5S818、D13S317、D21S11、D2S1338、D12S391；

所述五种不同颜色的荧光染料标记为6-FAM、HEX、TAMRA、ROX、NH618；

所述复合扩增试剂盒中的引物在扩增时的工作浓度如下：所述19对常染色体STR基因座的扩增引物的工作浓度：D7S820 0.07µM、TH01 0.1µM、D6S1043 0.12µM、TPOX 0.09µM、Penta E 0.13µM、D16S539 0.11µM、CSF1PO 0.13µM、D19S433 0.18µM、FGA 0.09µM、Penta D0.15µM、D8S1179 0.2µM、D18S51 0.03µM、D3S1358 0.04µM、vWA 0.05µM、D5S818 0.04µM、D13S317 0.06µM、D21S11 0.09µM、D2S1338 0.13µM、D12S391 0.16µM；所述27对Y染色体STR基因座的扩增引物的工作浓度：DYS392 0.04µM、DYS389I 0.03µM、DYS456 0.05µM、DYS389II 0.06µM、DYS19 0.05µM、DYS460 0.06µM、DYS518 0.07µM、DYS437 0.03µM、DYS5760.04µM、DYS439 0.04µM、Y_GATA_H4 0.05µM、DYS533 0.06µM、DYS391 0.05µM、DYS627 0.07µM、DYS570 0.05µM、DYS635 0.04µM、DYS481 0.05µM、DYS393 0.07µM、DYS390 0.06 µM、DYS448 0.08µM、DYS438 0.04µM、DYS458 0.05µM、DYF387S1a 0.06 µM、DYF387S1b 0.06µM、DYS385a 0.05µM、DYS385b 0.05µM、DYS449 0.06µM；所述1对性别识别基因座的扩增引物的工作浓度：Amelogenin 0.03µM；

所述复合扩增试剂盒的扩增反应程序如下：95℃ 2min；94℃ 5s、60℃ 45s、72℃ 45s，共30个循环；60℃终延伸20min；

所述复合扩增试剂盒的25µl的扩增反应体系如下：2.5×反应预混液10µl，5×引物混合物5µl，去离子水8µl，模板DNA 2µl，其中引物混合物为所述的47个基因座的扩增引物混合物；

所述复合扩增试剂盒还包括含有镁离子、dNTP、DNA聚合酶的反应预混液，47个基因座的等位基因ladder，DNA标准品和荧光分子量内标。