[发明专利]一种长效GLP-1及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201910170723.9 | 申请日： | 2019-03-07 |
| 公开（公告）号： | CN109705207A | 公开（公告）日： | 2019-05-03 |
| 发明（设计）人： | 许娜;向亮;刘文森;常影;杨雪 | 申请（专利权）人： | 许娜;向亮 |
| 主分类号： | C07K14/605 | 分类号： | C07K14/605;C12N7/01;C12N15/861;A61K38/26;A61P3/10 |
| 代理公司： | 长春众邦菁华知识产权代理有限公司 22214 | 代理人： | 于晓庆 |
| 地址： | 132000 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 制备 人脐带间充质干细胞 制备方法和应用 糖尿病药物 降糖 体内 有效治疗作用 糖尿病小鼠 重组腺病毒 基因修饰 药理作用 自身生物 半衰期 感染 小鼠 治疗 应用 | ||
1.一种长效GLP-1的制备方法，其特征在于，采用30MOI的重组腺病毒AdV-GLP-1感染人脐带间充质干细胞48h以上，得到一种长效GLP-1，感染效率为90％以上。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，采用以下方法制备重组腺病毒AdV-GLP-1：利用AdMax包装系统，构建人pDC316-EGFP/GLP1基因重组腺病毒载体，在脂质体介导下将所得的穿梭质粒和辅助质粒pBHGlox(delta)E1，3Cre共转染293细胞，经HEK293A细胞扩增，PCR方法鉴定含GLP-1基因的腺病毒载体构建成功，收集病毒液，纯化后测定病毒滴度，滴度达到1×109PFU/mL。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，采用以下方法制备人脐带间充质干细胞：复苏P2代冻存hUC-MSCs，1000r/min离心3min，弃上清，使用含5％AD(UltraGROTM-Advanced)的达科为间充质干细胞基础培养基(MSCBM)重悬细胞，计数后以1×106个/cm2密度接种于细胞培养瓶，37℃、5％CO2培养箱培养，当细胞达到80％融合时传代，利用流式细胞技术鉴定表面分子CD34、CD45、CD44、CD105、HLA-DR。
4.采用权利要求1至3中任意一项所述的制备方法制备的一种长效GLP-1。
5.如权利要求4所述的一种长效GLP-1在制备治疗2型糖尿病药物中的应用。
6.一种提高GLP-1半衰期的方法，其特征在于，采用30MOI的重组腺病毒AdV-GLP-1感染人脐带间充质干细胞48h以上，得到一种长效GLP-1，感染效率为90％以上。
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