[发明专利]一种改良的亚稳定态牛呼吸道合胞病毒融合前体F蛋白质及编码的DNA分子和其应用

权利要求书

1.一种牛呼吸道合胞病毒F蛋白的融合前体蛋白，包含至少一处选自下组的对野生型F蛋白的改造：

A、增加F蛋白三聚体每个单体内部以及单体之间二硫键的连接数量；

B、突变F蛋白三聚体内部至少一个氨基酸，将侧链较小的氨基酸突变成为侧链较大的氨基酸或增加内部的疏水结合；

C、突变剔除至少一个蛋白酶的酶切位点；

D、切除F蛋白三聚体至少一个动态较大氨基酸，代之以较短的连接肽；

E、延长F-蛋白质的C-终端阿尔法(α)螺旋构造。

2.根据权利要求1所述的融合前体蛋白，所述改造包含第143位甘氨酸、第404位丝氨酸、第103位丝氨酸、第262位丝氨酸突变为半胱氨酸，第288位异亮氨酸突变为苯丙氨酸，第187位缬氨酸突变为亮氨酸。

3.根据权利要求2所述的融合前体蛋白，还包含下述改造中的一种：

1)第159位组氨酸、第291位缬氨酸突变为半胱氨酸，剪除从109至137氨基酸序列，加入连接肽丝氨酸－谷氨酸－丝氨酸－丝氨酸－谷氨酸－丝氨酸－丝氨酸－谷氨酸；

2)第158位亮氨酸、第290位丝氨酸突变为半胱氨酸，剪除从114至132氨基酸序列，加入连接肽丝氨酸－谷氨酸－丝氨酸－丝氨酸－谷氨酸；

3)第158位亮氨酸、第290位丝氨酸突变为半胱氨酸，剪除从114至132氨基酸序列，加入连接肽丝氨酸－谷氨酸－丝氨酸－丝氨酸－谷氨酸－丝氨酸－丝氨酸－谷氨酸。

4.根据权利要求3所述的融合前体蛋白，选自下述序列中的一种：

(1)其氨基酸序列如SEQ ID NO:1、2或3所示；

(2)其氨基酸序列如SEQ ID NO:4、5或6所示；

(3)其氨基酸序列如SEQ ID NO:7、8或9所示；

(4)其氨基酸序列如SEQ ID NO:10、11或12所示；

(5)其氨基酸序列如SEQ ID NO:13、14或15所示；

(6)其氨基酸序列如SEQ ID NO:16、17或18所示；

(7)其氨基酸序列如SEQ ID NO:19、20或21所示。

5.编码权利要求1-4任意一项所述的融合前体蛋白的DNA分子。

6.根据权利要求5所述的DNA分子，其核苷酸序列选自SEQ ID NO:22-42所示序列中的一种。

7.权利要求1-4任意一项所述的牛呼吸道合胞病毒F蛋白的融合前体蛋白或权利要求5-6任意一项所述DNA分子在制备预防牛呼吸道合胞病毒的产品中的应用。

8.一种蛋白疫苗，由权利要求1-4任意一项所述的牛呼吸道合胞病毒F蛋白的融合前体蛋白中的至少一种制成。

9.一种DNA疫苗，包含权利要求5-6任意一项所述DNA分子中至少一种和质粒载体。

10.根据权利要求4所述的DNA疫苗，所述质粒载体为pVAC1-mcs质粒。