[发明专利]一种基于微滴数字PCR定量检测红薯成分的试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种基于微滴数字PCR定量检测红薯成分的试剂盒及其应用，属于分子生物学检测领域。基于微滴数字PCR定量检测红薯成分的试剂盒，包括BETA‑AMY基因的上游引物、β‑AMY基因的下游引物和β‑AMY基因的探针；所述试剂盒在定量检测样品中红薯成分的应用。红薯成分定量检测的微滴数字PCR方法，利用数字PCR系统探测红薯特异性单拷贝物种基因β‑AMY荧光信号，测得的红薯特异性单拷贝物种基因β‑AMY拷贝数浓度，根据拷贝数浓度(拷贝数/μL)与红薯质量(mg)的线性关系计算得到红薯成分的含量。本发明可对红薯成分进行特异性定量检测，具有简便、快速，检测灵敏度高的特点。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测领域，尤其涉及一种基于微滴数字PCR定量检测红薯成分的试剂盒及其应用。

背景技术

红薯富含淀粉，红薯淀粉是农作物中营养种类多的食品之一。但目前市场上也存在两方面的问题：一方面是红薯加工过程中混入掺杂其他来源，如木薯、玉米淀粉等低价值淀粉，另一方面在一些成本相对较高的淀粉如马蹄淀粉中掺入价格较低的红薯淀粉。

现有技术中，测定红薯源成分的方法有普通生物显微镜、扫描电镜、激光粒度分析、快速黏度分析和小角X射线散射(SAXS)、实时荧光PCR技术。但是上述技术在用于混合样品中红薯源成分的定量检测时，检测效果并不理想。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于微滴数字PCR定量检测红薯成分的试剂盒及其应用，以实现红薯源成分的特异性定量检测。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种基于微滴数字PCR定量检测红薯成分的试剂盒，包括β-AMY基因的上游引物、β-AMY基因的下游引物和β-AMY基因的探针；

所述β-AMY基因的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

所述β-AMY基因的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述β-AMY基因的探针的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

优选的，所述试剂盒还包括2×ddPCR^TM预混液。

本发明还提供了上述方案所述的试剂盒在定量检测样品中红薯成分中的应用。

优选的，所述定量检测红薯成分的方法，包括以下步骤：

1)提取系列梯度质量的红薯的基因组DNA；

2)以步骤1)中红薯基因组DNA为扩增模板，基于微滴式数字PCR扩增β-AMY基因；

3)读取和分析步骤2)中微滴式数字PCR反应扩增结果，得到β-AMY基因的拷贝浓度；

4)建立红薯质量与β-AMY基因的拷贝浓度的线性关系；

5)采用微滴式数字PCR反应扩增样品中β-AMY基因，读取和分析微滴式数字PCR反应扩增结果，得到样品的β-AMY基因的拷贝浓度；

6)将待测样品的β-AMY基因的拷贝浓度代入步骤4)中得到的线性关系中换算，得到样品中红薯成分的含量；

所述步骤1)～4)和步骤5)之间没有时间顺序限制。

优选的，步骤2)和步骤5)中所述微滴式数字PCR的反应体系如下：2×ddPCR^TM预混液10μL、10μmol/μL的上游引物0.5μL、10μmol/μL的下游引物浓度0.5μL、10μmol/μL探针0.5μL，扩增模板2μL，补水至20μL。