[发明专利]一种用于快速检测FMR1基因CGG重复序列的引物群及PCR试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于快速检测FMR1基因CGG重复序列的引物群，所述引物群包括特异性扩增FMR1基因CGG重复区的上游引物F SEQ ID NO.1和下游荧光引物R SEQ ID NO.2，以及针对CGG序列进行动态扩增的位于FMR1基因CGG序列内部的第三引物TP SEQIDNO.3和增强动态扩增所用的第四引物FP SEQ ID NO.4，本发明还公开了用于快速检测FMR1基因CGG重复序列的PCR试剂盒，本发明的有益效果：高效的扩增FMR1基因的CGG重复序列，使用第三、第四引物，对较长的CGG序列进行动态扩增，克服了由于短片段优势扩增引起的假阴性问题，提高了FMR1基因CGG序列判读的准确性和可靠性。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体来说，涉及一种用于快速检测FMR1基因CGG重复序列的引物群及PCR试剂盒。

背景技术

脆性X综合征(MIM#30955)是发病率仅次于唐氏综合征的第二大导致智力障碍的疾病，同时也是最常见的导致男性智力障碍的遗传病。位于X染色体长臂的脆性X智力低下1号基因(Fragile X Mental Reterdation 1，FMR1)5’端非编码区存在着一段以CGG为单位的三联核苷酸重复序列。随着CGG重复次数的增加，患者可能表现出一系列的临床症状。按照临床症状和发病风险，美国医学与遗传学会(American College of Medical Geneticsand Genomics，ACMG)将CGG重复序列分为四个等级：1：6-44之间被称为非受累型；2：45- 54之间称为中间型或灰区；3：55-200之间称为前突变型；4：大于200时被称为全突变型。当CGG重复数扩增至200以上时，FMR1基因5’端的CGG序列和基因上游的CpG 岛被超甲基化修饰，从而导致基因转录被沉默。FMR1编码的蛋白FMRP是一类RNA绑定蛋白，在神经元细胞中作为一种通用型的调节因子，对神经突触的形成有重要作用。因此全突变者在临床上表现出重度的智力障碍和发育迟缓，常常伴随有自闭症的倾向，也被称为脆性X综合征(Fragile XSyndrome，FXS)。

FMR1基因的前突变携带者一般没有重度智力障碍的表现，但由于该基因在RNA转录和蛋白质翻译过程中起到关键的调控作用，前突变FMR1基因被认为与一系列脆性X相关的临床症状有关，包括脆性X综合征、脆性X相关的原发性卵巢功能不全(Fragile Xassociated primary ovarian insufficiency，FXPOI)、脆性X相关的共济失调(Fragile Xassociated tremor and ataxia syndrome，FXTAS)。

脆性X综合征是一种X染色体连锁的智力低下遗传疾病，其在男性中的发病率约为1：4000，在女性中约为1：6000。临床症状复杂多样，包括中度到重度的智力障碍、常常伴有自闭症倾向、发育迟缓、癫痫、长脸、大耳朵、关节松弛、平足及男性患者特有的巨型睾丸。一直以来脆性X综合征的诊断需要神经科医生对患者的智力水平和体貌特征进行鉴定，并且需要Southern Blot对患者进行确诊。然而，使用Southern Blot诊断FXS需要约 10ml血量，两周时间，其实验流程复杂，需要操作人员具备一定的经验，而且结果往往只能定性，而不能定量。因此Southern Blot虽然被作为诊断工具一直沿用了下来，但其作为筛查手段则明显不足。传统的PCR方法在扩增大片段的CGG重复序列时常常遇到困难，无法得到准确的目标产物。对于携带一条全突变FMR1基因的女性，一般的PCR方法只能扩增另一条X染色体上正常的FMR1基因，全突变的FMR1基因由于高重复的CGG序列形成的二级结构无法得到有效扩增。

针对相关技术中的问题，目前尚未提出有效的解决方案。

发明内容

针对相关技术中的上述问题，本发明提出了一种用于快速检测FMR1基因5’端非编码区CGG重复序列的引物群及PCR试剂盒，能够准确定量的确定CGG重复数，可以快捷的查出致病基因的携带者以及病人并且有效降低了假阴性的可能性，可以用于孕前筛查、产前诊断、和辅助生殖领域，帮助阻断FXS患儿出生从而降低脆性X综合症的发病率。