[发明专利]黄盖小脆柄菇及在制备天然抑菌剂中的应用

权利要求书

1.一种黄盖小脆柄菇(Psathyrella candolleana)Gb.PY-F1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC M 2019125，保藏日期为2019年3月6日，保藏地址：中国武汉武汉大学，邮编：430072。

2.一种权利要求1所述黄盖小脆柄菇Gb.PY-F1在制备天然抑菌剂中的应用，其特征在于所述天然抑菌剂为金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)CMCC(B)26003抑菌剂。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述天然抑菌剂是黄盖小脆柄菇Gb.PY-F1经发酵培养获得的发酵液超声破碎后抽滤，取滤液经微孔滤膜过滤后浓缩，再用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩至恒重，获得黄盖小脆柄菇Gb.PY-F1发酵粗产物，粗产物再经硅胶柱层析，收集Rf值为0.4的流出液，即为抑菌剂。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述超声破碎条件为：在405W条件下，每工作3s，间歇4s，进行300次循环。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述天然抑菌剂按如下方法制备：(1)将黄盖小脆柄菇Gb.PY-F1接种于发酵培养基中，28℃，180r/min培养7d，获得发酵液；将发酵液超声破碎后抽滤，取滤液经微孔滤膜过滤后浓缩至原体积的1/3，用1倍体积乙酸乙酯萃取至乙酸乙酯相肉眼观察无明显颜色变化，合并乙酸乙酯萃取相，浓缩至恒重，获得黄盖小脆柄菇Gb.PY-F1发酵粗产物；所述发酵培养基组成：硝酸钠3g/L，磷酸氢二钾1g/L，硫酸镁0.5g/L，氯化钾0.5g/L，硫酸亚铁0.01g/L，蔗糖30g/L，溶剂为蒸馏水，pH7.0～7.2；(2)将黄盖小脆柄菇Gb.PY-F1发酵粗产物用乙酸乙酯溶解，加入硅胶，研磨均匀后，真空干燥，即为吸附样品的硅胶；将吸附样品的硅胶上样于硅胶色谱柱中，采用体积比100-0:0-100的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集体积比30:70石油醚-乙酸乙酯的流出液，将其浓缩至干，记为样品Gf.8；(3)样品Gf.8用乙酸乙酯溶解，加入硅胶，研磨均匀后，真空干燥，即为吸附样品Gf.8的硅胶，将吸附样品Gf.8的硅胶上样于硅胶色谱柱中，再以体积比75:15的乙酸乙酯-甲醇为流动相洗脱，收集第13个柱体积的流出液，记为组分Gf.8-13；(4)组分Gf.8-13用凝胶Sephadex LH-20以甲醇为洗脱剂进行柱分离，流速为1drop/s，收集Rf值为0.4的组分，记为组分Gf.8-13a；(5)组分Gf.8-13a经甲醇溶解重结晶，晶体干燥，获得黄盖小脆柄菇Gb.PY-F1发酵产物，即为抑菌剂。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于步骤(1)所述黄盖小脆柄菇Gb.PY-F1发酵前先进行活化，所述活化方法为：黄盖小脆柄菇Gb.PY-F1接种于PDA培养基中，置于28℃恒温培养箱中培养7d；PDA培养基组成：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂15～20g/L，溶剂为蒸馏水，自然pH。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于步骤(2)所述硅胶与发酵粗产物质量比为1.5：1。

8.如权利要求5所述的应用，其特征在于步骤(3)所述硅胶与样品Gf.8质量比为1.5：1。