[发明专利]一株分泌抗格列本脲单克隆抗体的杂交瘤细胞株E号及其应用

说明书

一株分泌抗格列本脲单克隆抗体的杂交瘤细胞株E号及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明分泌抗格列本脲单克隆抗体的杂交瘤细胞株E号，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2018年5月24日，保藏编号CGMCC No.17305。本发明将格列本脲的完全抗原与等量弗氏佐剂混合乳化，通过颈背部皮下多点注射免疫BALB/c小鼠，最终得到分泌抗格列本脲单克隆抗体的杂交瘤细胞株E号。此细胞株分泌的单克隆抗体，对格列本脲具有较好的特异性和检测灵敏度（IC₅₀值为0.8 ng/mL），可实现对保健食品中格列本脲残留量的检测，为食品中格列本脲残留的免疫检测提供了原料，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一株分泌抗格列本脲单克隆抗体的杂交瘤细胞株E号及其应用，属于食品安全免疫检测领域。

背景技术

格列本脲（Glibenclamide）是第二代磺脲类口服降糖药的代表，其作用机制主要是促进胰腺胰岛B细胞分泌胰岛素，它还可以通过增加门静脉胰岛素水平或对肝脏直接作用，抑制肝糖原分解和糖原异生作用使肝生成和输出葡萄糖减少，也可能增加胰外组织对胰岛素的敏感性和糖的利用。因此，总的作用是降低空腹血糖与餐后血糖。其疗效特点为降糖作用强、持续时间长。由于我国糖尿病人的增长速度较快，我国的糖尿病非处方药、保健食品市场也是种类繁多。目前，某些中药保健品生产厂家为增强降糖效果，在其生产的中药保健品中非法掺入化学药品格列本脲。

格列本脲的降血糖作用较甲苯磺丁脲强250～500倍。由于它清除率长，最易发生低血糖反应，故临床使用要谨慎。而长期服用掺有格列本脲的保健品可能会产生严重的低血糖反应，特别是服用过量时，有致死的危险。除此之外，格列本脲可引起血小板减少性紫瘢，过敏性血管炎。该药有肝脏毒性，在不知情的情况下服用格列本脲是非常危险的，长期大量地服用格列本脲，最终会造成病人的低血糖和肾病，甚至导致死亡。

目前，国内外报道的格列本脲化合物检测主要是通过高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、气相色谱串联质谱(GC-MS)、毛细管电泳法（CE）等。但这些方法的样品前处理过程复杂，实验周期长，不适合大量样本的快速检测。而国内尚未建立格列本脲的检测标准及其测定方法，这给格列本脲食品添加剂生产使用和进出口贸易以及食品卫生监测工作带来很大的困难。基于酶联免疫分析方法（ELISA）简单、灵敏、快捷和高通量的优点，建立一种高效的格列本脲免疫学检测方法很有必要，而建立此方法的一个重要前提即需筛选出针对格列本脲的高特异性单克隆单体。

发明内容

本发明的目的是提供一株分泌抗格列本脲单克隆抗体的杂交瘤细胞株E号及其应用，由该细胞株制备的抗体对格列本脲具有较好特异性和检测灵敏度，可以用来建立格列本脲的免疫学检测方法。

本发明的技术方案，一株分泌抗格列本脲单克隆抗体的杂交瘤细胞株E号，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2018年5月24日，保藏编号CGMCC No.17305。

抗格列本脲单克隆抗体，它由所述保藏编号CGMCC No.17305的抗格列本脲单克隆抗体的杂交瘤细胞株E号分泌产生。

所述抗格列本脲单克隆抗体的应用，用于食品安全检测中格列本脲残留的分析检测。

本发明所述分泌抗格列本脲单克隆抗体的杂交瘤细胞株E号的制备基本步骤为：

（1）半抗原结构：

结构类似物 Mol. Wt: 501