[发明专利]一种新型翻译组Ribosome-seq建库方法

权利要求书

1.一种新型翻译组Ribosome-seq建库方法，包括如下步骤：

步骤S1，利用分子排阻色谱法对待测样品进行RPF的分离和提取，获得RNA样品；

步骤S2，对RNA样品去除RNA样品中的rRNA；

步骤S3，对去除rRNA后的RNA样品进行5’磷酸化反应；

步骤S4，利用磷酸化后的RNA样品构建RNA测序文库。

2.如权利要求1所述的一种新型翻译组Ribosome-seq建库方法，其特征在于：于：所述待测样品来源于植物、动物或微生物；和/或，所述待测样品为组织、细胞、组织裂解物或细胞裂解物。

3.如权利要求2所述的一种新型翻译组Ribosome-seq建库方法，其特征在于：于：于步骤S1之前，还包括对检测样本经细胞固定、细胞清洗、细胞收集以及细胞裂解得到细胞裂解物的步骤，所述待测样品为细胞裂解物。

4.如权利要求3所述的一种新型翻译组Ribosome-seq建库方法，其特征在于：于：于步骤S1中，于待测样品加入核糖核酸酶I和脱氧核糖核酸酶I，室温混匀孵育，然后加入SUPERase*In RNase inhibitor，终止消化反应；接着进行分离纯化RPF；最后提取RNA，并进行质检。

5.如权利要求4所述的一种新型翻译组Ribosome-seq建库方法，其特征在于，所述分离纯化RPF的步骤采用MicroSpin S-400Column层析柱进行分离纯化RPF。

6.如权利要求4所述的一种新型翻译组Ribosome-seq建库方法，其特征在于：所述提取RNA，并进行质检的步骤利用microRNA提取试剂盒，提取RNA，并利用核酸定量仪器检测RNA的浓度和质量，琼脂糖凝胶电泳检测RNA条带。

7.如权利要求6所述的一种新型翻译组Ribosome-seq建库方法，其特征在于：RPF的浓度应≥20ng/μl，总量应≥200ng，满足建库条件；若浓度在10-20ng/μl，总量在100-200ng，可尝试风险建库；若浓度低于10ng/μl，总量低于100ng，不建议往下建库。

8.如权利要求4所述的一种新型翻译组Ribosome-seq建库方法，其特征在于，步骤S2进一步包括：

S2.1，于Nuclease free微量离心管中，利用nuclease-free水将RNA样品稀释，冰上放置备用，并将RNA样品与探针杂交，用移液器轻轻吹打混匀，并转瞬离心将样品收集至管底，将样品置于PCR仪中进行反应，瞬时离心将样品收集至管底，并置于冰上；

S2.2，取一支干净的PCR管，往里加入上一步产物，RNase H Reaction buffer、RNase H以及DEPC处理水，轻轻吹打混匀，将其置于PCR仪中，37℃作用30分钟，转瞬离心将样品收集至管底，并置于冰上，接着加入DNase I消化探针，37℃作用30分钟，接着用RNA CleanBeads纯化RNA。

9.如权利要求8所述的一种新型翻译组Ribosome-seq建库方法，其特征在于，步骤S3进一步包括：

S3.1，配置反应体系；

S3.2，将上述配制好的反应体系放置在PCR仪中，37℃作用30分钟；

S3.3，利用RNA Clean Beads纯化RNA。

10.如权利要求9所述的一种新型翻译组Ribosome-seq建库方法，其特征在于：于步骤S4中，依次进行3’SR Adapter连接反应，并对过量的3’SR Adapter进行封闭处理，然后5’SRAdapter连接反应，反转录，PCR扩增，磁珠法纯化扩增产物，6％PAGE切胶回收进行片段筛选与回收，文库定量及进行质检。