[发明专利]一种蓝藻中藻蓝蛋白的提取方法

说明书

本发明涉及蛋白提取技术领域；具体涉及一种蓝藻中藻蓝蛋白的提取方法，包括：破壁、粗过滤、纯化；所述粗过滤是将破壁所得物用0.5‑1μm的微滤膜过滤后，依次加入油脂、去离子水进行混合，经水油分离去除油脂后，再用0.5‑1μm的微滤膜过滤；本发明具有产率高、纯度高、蛋白稳定性强、提取周期短，成本低，操作简单，资源利用率好的特点。

技术领域

本发明涉及蛋白提取技术领域；具体涉及一种蓝藻中藻蓝蛋白的提取方法。

背景技术

蓝藻中含有有效物质包括氨基酸、多糖、藻胆蛋白、藻毒素；藻蓝蛋白是存在于蓝藻、红藻、隐藻中的一类水溶性捕光色素蛋白，研究表表明，藻蓝蛋白具有抗癌、促进血细胞再生等功效，被广泛用作天然色素、医药保健品和分子新生物学研究中的荧光试剂。藻蓝蛋白多从螺旋藻、眉藻、席藻等中提取，关于蓝藻藻蓝蛋白的提取研究较少。

目前藻蓝蛋白主要通过抽提、粗过滤、微滤、超滤、低温静置离心等提纯方法进行提取；如专利号CN201510692709.7公开的一种活性炭预处理联合盐析法提取纯化藻蓝蛋白的方法，包含如下步骤：A.将蓝藻进行破壁以产生藻液；B.将所述藻液进行固液分离，然后将所得液体进行离心，之后取上清液，以获得藻蓝蛋白粗提液；C.向上述藻蓝蛋白粗提液中加入适量活性炭，搅拌并静置后离心，再次获得上清液；D.向步骤C中获得的上清液中加入硫酸铵，搅拌并静置后离心，第三次获得上清液；E.向步骤D中获得的上清液中追加适量硫酸铵，搅拌并静置后离心，获得沉淀，将沉淀用磷酸缓冲液溶解，获得藻蓝蛋白溶液。又如专利号CN201410409170.5公开的一种藻蓝蛋白的提取方法，包括将含有藻蓝蛋白的鲜藻或经过预浸泡的藻粉加入-50℃～-10℃的冰粉中，将搅拌速度控制在1000r/min～3000r/min的条件下进行破壁处理，得到含有藻蓝蛋白的破壁液；再将得到的含有藻蓝蛋白的破壁液进行分离、纯化和干燥，得到成品藻蓝蛋白。但现有技术在产率、纯度、成本方面均不太理想，故难以实现产业化。

发明内容

本发明为解决上述技术问题，提供了一种蓝藻中藻蓝蛋白的提取方法。

具体是通过以下技术方案来实现的：

一种蓝藻中藻蓝蛋白的提取方法，包括：破壁、粗过滤、纯化；所述粗过滤是将破壁所得物用0.5-1μm的微滤膜过滤后，依次加入油脂、去离子水进行混合，经水油分离去除油脂后，再用0.5-1μm的微滤膜过滤。

所述油脂的用量为蓝藻质量15-20％，混合时间为5-10min。

所述去离子水的用量为蓝藻质量50-60％，混合时间为5-10min。

所述破壁的方法为：将蓝藻与食盐按1：(0.1-0.2)的质量比混合后，置于真空冷冻至温度为零下20-零下10℃后研磨至过50-80目，再加热至温度为30-35℃，然后加入等温的提取液进行恒温浸泡15-20min。

所述提取液用量为蓝藻质量1.5-2倍。

所述提取液由如下质量份物质组成：5-8份柠檬酸钠、13-17份十二烷基硫酸钠、2-6份酒石酸钠、10-12份磷酸二氢钠、80-90份去离子水。

所述纯化的方法为：

(1)将粗过滤液与吸附填料混合搅拌10-15min后，固液分离，洗脱固形物，收集洗脱液；

(2)将洗脱液以10-20mL/min的流速，通过树脂进行脱色纯化，收集二次洗脱液；

(3)将二次洗脱液用中空纤维膜进行超滤。

所述吸附填料为羟基磷灰石、改性牡蛎壳按质量比为1：(0.05-0.07)。

所述改性牡蛎壳是将牡蛎壳研磨至过100目筛后，然后加入羧甲基纤维素钠及聚乙二醇进行改性；羧甲基纤维素钠的用量为牡蛎壳质量5-8％，聚乙二醇的用量为牡蛎壳质量20-25％。