[发明专利]预测肾透明细胞癌复发转移的分子标记物及其应用

说明书

本发明公开了一种预测肾透明细胞癌复发转移的分子标记物及其应用。一种能够用于ccRCC转移早期诊断的生物标记物，该标记物为CREB基因的甲基化产物。本发明上述的用于ccRCC转移早期诊断的生物标记物，具体通过提取ccRCC病人手术后口服sunitinib药物血清中DNA，经亚硫酸盐修饰后进行甲基化特异性PCR；将得到的CREB基因甲基化；结果和病人在治疗过程中的复发转移情况相结合，进而预测CREB基因甲基化与ccRCC复发转移和生存之间的关系。具有能够发现临床上早期肾癌患者的微转移，进而调整治疗策略和正确评估预后的优点。

技术领域

本发明涉及生物医学检测技术领域，具体涉及分子标记在对局限性肾透明细胞癌复发转移早期预测技术领域，即一种预测肾透明细胞癌复发转移的分子标记物及其应用。

背景技术

肾细胞癌(renal cell carcinoma，RCC)起源于肾实质泌尿小管上皮，是最常见、最致命的肾脏恶性肿瘤，发病率占全部肾脏肿瘤的90％。RCC是一种异质性疾病，包含一系列有明显遗传和/或表观遗传差异和临床特征差异的恶性肿瘤，主要包括肾透明细胞癌(clear cell RCC，ccRCC)、乳头状细胞癌和嫌色细胞细胞癌。ccRCC的发病率占肾细胞癌的90％。

目前手术切除术仍然是治疗ccRCC的最主要手段，但是治疗效果不佳。同时，因为不同肾细胞癌亚型有明显遗传学和表观遗传学等差异，致使不同RCC亚型患者的预后差异较大。ccRCC具有极高的转移率，研究发现30％的患者在诊断时已经发生转移，另有30-50％的患者发生术后转移或复发。因此，寻找新的被广泛认可的特异性标志物对ccRCC的转移做早期预测，将对提高病人的生存意义重大。

肿瘤的发生和发展伴随着整个基因组基因表达的失调，其中DNA甲基化与肿瘤发生关系最为密切。一般认为，基因的甲基化程度与基因表达成反平行关系。研究表明，原癌基因c-myc、EGF和AFP在胚胎发育过程中的表达受甲基化的调节，即随着这些基因甲基化程度降低，它们的表达逐渐升高。但在出生后，这些基因被重新甲基化，在特定的组织中表达受到限制。Ohtsuki等在对人骨髓瘤细胞的c-myc进行了CCGG序列的甲基化状况和基因表达的研究，在排除了因其他基因结构异常而致该有表达的情况下，发现c-myc第三外显子CCGG序列与正常人扁桃体B淋巴细胞相比显著低甲基化，二者这种低甲基化与c-myc在骨髓瘤细胞中高表达有关。Sharrard等用c-myc基因亚片段作为探针，分别对该基因各段的CCGG位点甲基化程度进行了检测，发现c-myc 5’端和第一、二外显子的甲基化水平在正常结肠粘膜、腺瘤和腺癌都一致，而第三外显子在腺瘤和腺癌中明显低甲基化。深入研究发现，第三外显子的低甲基化可能影响c-myc蛋白的结合并改变基因的表达。由此可见，在肿瘤组织中，癌基因的高表达伴随其低甲基化。Maria等从人膀胱癌中分理出具有转化活性的c-Ha-ras基因，用原核生物甲基化酶分别将该基因CCGG和CGCG位点完全甲基化后，在转染细胞发现其转化率下降80％。若再用5-杂氮胞苷处理已经转染、但未转化的细胞，c-Ha-ras基因又重新获得转化能力。因此，他们认为这种能力的获得是由于癌基因的一些重要甲基化位点的去甲基化原因。