[发明专利]依诺肝素钠中苄索氯铵的测定方法

说明书

本发明属于医药技术领域，具体公开了一种依诺肝素钠中残留苄索氯铵的检测方法。采用高效液相色谱法进行分析检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以乙腈和辛烷磺酸钠‑磷酸溶液体系为流动相，以检测波长为210‑230nm，进行高效液相色谱法分析检测。该检测方法检测限度低，灵敏度高，专属性强，精密度良好，准确度高，耐用性好。可有效检测依诺肝素钠中残留苄索氯铵，从而可用于依诺肝素钠的质量控制，为依诺肝素钠产品质量提供保障。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种依诺肝素钠中苄索氯铵的测定方法。

背景技术

依诺肝素钠是由来源于猪肠黏膜的肝素钠经成盐，酯化后得到的肝素-苯索氯铵盐的苄基酯衍生物在碱性条件下发生beta-消除反应裂解生成的低分子量肝素钠，其主要特征为糖链的非还原末端具有4-烯醇吡喃糖酸，在糖链的还原末端含有15～20％的1,6-酐环状结构。平均分子量为3800～5000，小于2000含量为12.0～20.0％，2000～8000含量为68.0～82.0％。抗FХa活性为90～125IU/mg，抗FⅡa活性为20～35IU/mg，抗FХa/抗FⅡa为3.3～5.3。硫酸根与羧基比不小于1.8。依诺肝素钠结构式如下所示。

依诺肝素钠是一种低分子肝素钠盐，为多组分物质。以猪粘膜肝素为起始原料，经肝素季铵盐制备、肝素苄酯的制备、对肝素苄酯进行碱解聚、以酸中和、醇沉淀，精制、脱色，脱水干燥，得到依诺肝素钠成品。在依诺肝素钠的制备过程中，添加苄索氯铵，在成品质量控制中应当对其残留进行限度检测。吴建兵等，依诺肝素钠中残留苄索氯铵限度检测方法的建立，《中国健康月刊》，2011年第30卷第11期，358～359，公开了一种依诺肝素钠中残留苄索氯铵的检测方法，该方法苄索氯铵的检测限为5ng，灵敏度低，对微量苄索氯铵不能准确定量。

Hsiaoling Wang，Determination of benzethonium chloride in anthraxvaccine adsorbed by HPLC，biologicals 34(2006)257-263.公开了一种采用高效液相色谱法测定炭疽疫苗中的苄索氯铵，该色谱法通过在具有二极管阵列检测器(DAD)的封端C18柱上用甲醇/262mM乙酸铵(80/20，v/v)进行等度反相分离来进行。该方法的检测限度为0.5ppm，灵敏度低。发明人将该方法用于依诺肝素钠中苄索氯铵的检测，依诺肝素钠对苄索氯铵测定造成干扰，无法测定依诺肝素钠中的苄索氯铵。

Markus Ganzera，等在J.Agric.Food Chem.2006,54,3768-3772.公开了一种HPLC/UV/MS法同时测定葡萄柚籽中18种防腐剂的方法，该方法是在安捷伦的ZorbaxEclipse XDB-C8柱(150×4.6mm，5μm)进行测定，流动相为含有0.05％TFA水溶液的流动相(A)和含有0.05％TFA(B)的乙腈和2-丙醇的1：1混合物；梯度洗脱实现18种防腐剂的分离。该方法基线噪音大，灵敏度低同样不适用于依诺肝素钠中苄索氯铵的检测。

专利RU2529814C1公开了一种药物中苄索氯铵的测定方法，采用了乙腈或甲醇和水的混合溶液为流动相，并添加四烷基铵盐，梯度洗脱。该方法缩短了苄索氯铵的保留时间，节约了检测时间，但是应用与依诺肝素钠中残留苄索氯铵的检测时，依诺肝素钠对苄索氯铵的测定仍有干扰，不适用于依诺肝素钠中苄索氯铵的检测。

谈芳，蒋锋等，RP-HPLC法测定复方外用消毒溶液中主药的含量，淮海工学院学报(自然科学版)2015.24(3),51-53.公开了一种复方外用消毒液(主成分是苄索氯铵、尿囊素和马来酸氯苯那敏)的检测方法，采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以乙腈-缓冲液(含0.01mol/L的磷酸二氢铵缓冲液，用磷酸调节pH至3.2)(体积比为85:15)为流动相，流速1.0mL/min，检测波长223nm，进样量20μL。本方法苄索氯铵的检测限度为0.32mg/L，灵敏度低且应用于依诺肝素钠中残留苄索氯铵的检测时，依诺肝素钠峰干扰苄索氯铵测定。