[发明专利]一种造血干细胞的冻存保护剂和简易冻存方法

说明书

本发明公开了一种造血干细胞的冻存保护剂和简易冻存方法。在现有技术基础上将DMSO含量降到3％后，造血干细胞的冻存存活率显著降低，而本发明发现，在冻存保护剂中添加野甘草醇可以抵消DMSO含量降低带来的冻存损伤，野甘草醇对造血干细胞具有冻存保护作用，抑制Caspase‑3表达可能是野甘草醇发挥对造血干细胞冻存保护作用的一个机制。

技术领域

本发明属于生物领域，涉及造血干细胞冻存，具体涉及一种造血干细胞的冻存保护剂和简易冻存方法。

背景技术

造血干细胞(HSCs)以极低数量存在于哺乳动物的骨髓、胎肝、外周血及脐带血中，是一种具有高度自我更新能力和多向分化潜能的干细胞，是所有成熟血细胞的前体细胞。造血干细胞移植是治疗恶性血液病、遗传性疾病及免疫缺陷疾病的重要手段。

传统的以10％DMSO作为冷冻保护剂、程序降温、液氮冷冻保存人造血干细胞的方法以其能够长期保存且细胞损失少而为人们所推崇，在临床上普遍应用。其缺点是操作复杂，费用昂贵，解冻后常会出现细胞凝聚现象。为了获得简单理想的冷冻保存人造血干细胞的方法，从80年代起人们开始将传统方法从冷冻保护剂、细胞冷冻方法和保存温度方面进行了改进，形成了以5％DMSO和6％羟乙基淀粉(HES)为冷冻保护剂、非程控降温、-80℃直接冷冻保存造血干细胞的简化方法。但是，DMSO是一种穿透性保护剂，常温下对造血干细胞等组织细胞有一定毒性，有报告在向患者输入含≥5％DMSO的冻存干细胞时，可引起不同程度的高血压/低血压、心慌胸闷、心率失常等副作用。

研究表明，将DMSO含量降到3％后，副作用基本可以忽略。但是3％DMSO对造血干细胞的冻存效果不及5％～10％DMSO。

发明内容

本发明旨在克服现有技术不足，提供一种造血干细胞的冻存保护剂和冻存方法，用于造血干细胞6个月内的-80℃直接冻存，在将DMSO含量降到3％后不明显降低冻存保护效果。

本发明目的通过以下技术方案实现：

一种造血干细胞的冻存保护剂，含有野甘草醇。

进一步地，由DMSO、羟乙基淀粉和野甘草醇经生理盐水溶解配制而成。

更进一步地，DMSO体积百分浓度为15％。

更进一步地，羟乙基淀粉质量体积浓度为40％。

更进一步地，野甘草醇浓度为100μM。

更进一步地，DMSO体积百分浓度为15％，羟乙基淀粉质量体积浓度为40％，野甘草醇浓度为100μM。

上述冻存保护剂的使用方法：冻存保护剂与造血干细胞悬液按照体积比1:4混合使用。

上述冻存保护剂在造血干细胞-80℃直接冷冻方面的应用。

一种造血干细胞的简易冻存方法，使用上述冻存保护剂将造血干细胞于-80℃直接冻存。

野甘草醇在造血干细胞冻存保护方面的应用。

有益效果：

在现有技术基础上将DMSO含量降到3％后，造血干细胞的冻存存活率显著降低，而本发明发现，在冻存保护剂中添加野甘草醇可以抵消DMSO含量降低带来的冻存损伤，野甘草醇对造血干细胞具有冻存保护作用，抑制Caspase-3表达可能是野甘草醇发挥对造血干细胞冻存保护作用的一个机制。

附图说明

图1为流式细胞仪检测分选后CD34⁺HSCs阳性率的结果图；

图2为细胞回收率检测结果；

图3为细胞存活率检测结果；