[发明专利]一种RAA荧光法检测蓝氏贾第鞭毛虫的引物、探针及检测方法

权利要求书

1.一种RAA荧光法检测蓝氏贾第鞭毛虫的引物，其特征在于，所述引物序列如下：

上游引物：5’-TCAGGAAGGAGGCCCTCAAGAGCCTGAACG-3’；SEQ ID NO.3；

下游引物：5’-AGCTTCGTGTTTGTGAGCGCTTCTGTCGTG-3’；SEQ ID NO.5。

2.根据权利要求1所述的一种RAA荧光法检测蓝氏贾第鞭毛虫的引物，其特征在于，所述上游引物和下游引物的使用浓度为5～20μM。

3.根据权利要求2所述的一种RAA荧光法检测蓝氏贾第鞭毛虫的引物，其特征在于，所述上游引物和下游引物的使用浓度为10μM。

4.一种RAA荧光法检测蓝氏贾第鞭毛虫的探针，其特征在于，所述探针序列如下：

5’-TYGCCACGGAGAACGCMGARAGGAAGAAGATGTAYGACCAGCTCAACG-3’；SEQ ID NO.8；

所述探针采用荧光报告基团和荧光淬灭基团进行修饰，荧光报告基团修饰在探针序列离5’端碱基数31bp的位置上；荧光淬灭基团修饰在探针序列离5’端碱基数33bp的位置上，荧光报告基团与淬灭基团之间间隔1个碱基G，其中离5’端碱基数32bp的位置上的G用四氢呋喃残基替换。

5.根据权利要求4所述的一种RAA荧光法检测蓝氏贾第鞭毛虫的探针，其特征在于，所述荧光报告基团为FAM、HEX、TET、JOE或VIC；所述荧光淬灭基团为BHQ1、BHQ2或BHQ3。

6.根据权利要求5所述的一种RAA荧光法检测蓝氏贾第鞭毛虫的探针，其特征在于，所述荧光报告基团为FAM；所述荧光淬灭基团为BHQ1。

7.根据权利要求4-6任一项所述的一种RAA荧光法检测蓝氏贾第鞭毛虫的探针，其特征在于，所述探针的浓度为5～40μM。

8.根据权利要求7所述的一种RAA荧光法检测蓝氏贾第鞭毛虫的探针，其特征在于，所述探针的浓度为10μM。

9.一种RAA荧光法检测蓝氏贾第鞭毛虫的方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)提取待检样本DNA，获得DNA提取液；

(2)将恒温荧光基因检测仪接通电源进行预热，对反应参数进行设置；

(3)在42.5μL反应缓冲液中加入浓度为10μM的2μL引物和0.5μL探针，充分混合后添加到RAA荧光基础反应试剂中混合，得到反应预混液；

(4)将5μL所述步骤(1)中得到的DNA提取液与所述步骤(3)中得到的反应预混液充分混合，得到的反应体系放入恒温荧光基因检测仪检测荧光信号；

(5)根据检测仪器中的阳性判定方法，将斜率值K≥20时，判定为阳性；斜率值K＜20时判定为阴性。

10.根据权利要求9所述的一种RAA荧光法检测蓝氏贾第鞭毛虫的方法，其特征在于，所述反应参数设置为39℃，反应时间：15min。