[发明专利]一种多重PCR试剂盒及用其快速检测乳酸片球菌的方法

说明书

本发明属于微生物鉴定领域，具体涉及一种多重PCR试剂盒及用其快速检测乳酸片球菌的方法。本发明利用乳酸片球菌的三个特异性强的靶基因，扩增获得三对引物对，进行电泳检测；并据此提供了一种可快速检测出乳酸片球菌的多重PCR试剂盒。利用本发明提供的方法和试剂盒，可快速检测出乳酸片球菌，检测的特异性强、灵敏度高、操作简单、成本低，适合进行推广使用。

技术领域

本发明属于微生物鉴定领域，具体涉及一种多重PCR试剂盒及用其快速检测乳酸片球菌的方法。

背景技术

乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)为片球菌属的革兰氏阳性菌，菌体为圆球状，细菌细胞一般成对生长，少数单细胞生长，不成链状排列。乳酸片球菌作为有关部门批准使用的有益菌之一，在各行各业均得到了广泛的应用。在食品加工方面，该菌产生的乳酸片球菌素可作为食品防腐剂；在医疗方面，该菌具有一定的抗氧化特性，可以在提高机体免疫力、延缓衰老、调节肠道菌群、预防和治疗肠道疾病、治疗慢性尿道感染等方面发挥作用；在畜牧养殖方面，乳酸片球菌产生的乳酸片球菌素是绿色饲料添加剂。

目前鉴定细菌的主流方法是16Sr DNA高通量测序，采用此法，需将PCR扩增产物送至生物公司测序，耗时长、成本高。例如CN102154439A“粪肠球菌、屎肠球菌及乳酸片球菌的培养基及其检测方法”，公开了一种可以鉴定乳酸片球菌的培养基，需要培养48～72h，鉴定时间较长。即使存在一些可能可以快速检测乳酸片球菌的方法，也依然存在诸多不足。例如CN105132561A“一种能同时鉴定巨型球菌、果胶杆菌、乳酸片球菌三种啤酒污染菌的快速检测方法”，可以通过扩增乳酸片球菌的部分16Sr RNA基因从而鉴定样品中是否含有乳酸片球菌，该方法并未针对性扩增乳酸片球菌的特异性靶基因，无法有效区分与乳酸片球菌相似度高的其它微生物，特异性差。

发明内容

本发明的目的是提供一种多重PCR试剂盒及用其快速检测乳酸片球菌的方法。

为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：可特异性鉴定出乳酸片球菌的靶基因，所述靶基因包括：Mle基因、Aldo基因、DpⅢ基因；所述Mle基因的序列如SEQ IDNO：1所示；所述Aldo基因的序列如SEQ ID NO：2所示；所述DpⅢ基因的序列如SEQ ID NO：3所示。

相应的，利用所述Mle基因扩增获得的引物对，其序列如SEQ ID NO：4和SEQ IDNO：5所示。

相应的，利用所述Aldo基因扩增获得的引物对，其序列如SEQ ID NO：6和SEQ IDNO：7所示。

相应的，利用所述DpⅢ基因扩增获得的引物对，其序列如SEQ ID NO：8和SEQ IDNO：9所示。

相应的，一种检测乳酸片球菌的试剂盒，所述试剂盒中至少包括利用Mle基因和/或Aldo基因和/或DpⅢ基因扩增获得的引物对。

优选的，所述试剂盒中至少同时包括利用Mle基因、Aldo基因、DpⅢ基因中的任意两个基因扩增获得的引物对。

优选的，所述试剂盒中同时包括利用Mle基因、Aldo基因、DpⅢ基因扩增获得的引物对。

相应的，一种检测乳酸片球菌的方法，所述方法利用乳酸片球菌的Mle基因和/或Aldo基因和/或DpⅢ基因进行。

优选的，所述方法同时利用乳酸片球菌的Mle基因、Aldo基因、DpⅢ基因进行。

优选的，所述方法具体为：利用所述各基因扩增出引物对进行检测。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明提供了乳酸片球菌的全新鉴定靶基因：Mle基因、Aldo基因和DpⅢ基因，并相应提供了引物。使用所述靶基因鉴定乳酸片球菌，特异性强，灵敏度高。