[发明专利]一种用于辅助检测前列腺癌的ddPCR引物组合物及其应用

说明书

本发明提供了一种用于辅助检测前列腺癌的ddPCR引物组合物及其应用，所述引物组合物包括针对PCA3基因的上下游引物，针对PSGR基因的上下游引物和针对MALAT1基因的上下游引物；本发明通过优选三种特异性的基因并设计相匹配的引物，优化扩增体系和条件，各步骤各条件相互配合，实现了准确特异地检测三种基因的表达情况的目的，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于辅助检测前列腺癌的ddPCR引物组合物及其应用。

背景技术

前列腺癌是中老年人最常见的恶性肿瘤。在欧美国家，其发病率已连续多年居男性恶性肿瘤发病率首位，死亡率居第二位。我国前列腺癌发病率虽然低于欧美国家，但是随着我国人口老龄化和饮食结构的改变，近年来也呈现出上升趋势。

目前，前列腺癌的诊断主要依赖于血清前列腺癌特异抗原(PSA)的水平和直肠指检(DRE)。血清PSA是前列腺癌最常用的标志物，但是PSA的假阳性率较高，PSA水平在4-10ng/ml之间的患者，阴性活检率高达60-70％，这给患者和社会都带来了巨大的负担。因此，很有必要寻找一种更特异的指标用于前列腺癌的筛查和早期诊断。

CN108531594A提供了一种多基因联合用于前列腺癌早期筛查的无创检测方法及其试剂盒，所述联合基因为APC、NID2、p16，通过设计特异性甲基化引物分别检测APC、NID2、p16三个靶基因片段甲基化的核酸序列，实现对前列腺癌的早期筛查和辅助诊断，分别通过三通道荧光定量PCR法分析尿沉渣中APC、NID2、p16三个基因标志物的甲基化水平，并根据所报告的CT值判读样本的阳性或阴性结果。CN103857796A提供一种对前列腺癌的特异度高且能够检测出恶性度低的前列腺癌组织的检测灵敏度高的前列腺癌的检测方法及前列腺癌标记物。其为包括由从受检者采取的受检者样品检测前列腺癌标记物的表达量的步骤的前列腺癌细胞的检测方法、用于前列腺癌细胞的检测方法的引物及前列腺癌标记物，所述前列腺癌标记物包含选自miR-124、miR-9和miR-137中的1种以上的miRNA。但上述现有技术选择的标记物与前列腺癌关联度不够特异，其检测结果的温度下和准确性不高。

数字PCR(dPCR)技术则为第三代PCR，与Q-PCR技术不同，数字PCR采用绝对定量的方式，不依赖于标准曲线和参照样本，直接检测目标序列的拷贝数。由于这种检测方式具有比传统qPCR更加出色的灵敏度和特异性、精确性的优势，操作简单，周期也很短，ddPCR迅速得到了广泛的应用。

尿液作为检测样本为非侵入性前列腺癌筛查和诊断带来了巨大的希望。前列腺癌抗原3(PCA3)已经作为一种新型的尿液诊断标志物获得美国FDA批准，但近期在中国人群的研究较少。其他的尿液生物标志物如转移相关肺腺癌转录物1(MALAT-1)、前列腺特异性G蛋白偶联受体(PSGR)被认为与前列腺癌同样相关。尿液MALAT-1与中国人群的前列腺癌患病风险有关。PSGR过度表达已被证明与前列腺癌风险相关，尿液PSGR具有用于前列腺癌的早期诊断的潜在价值。

因此，研发一种基于ddPCR的检测前列腺癌相关生物标志物的引物组合物并用于尿液样本的无创检测，解决患者痛苦，具有重大的现实意义。

发明内容

为解决现有技术的不足和满足市场的需求，本发明提供了一种用于辅助检测前列腺癌的ddPCR引物组合物及其应用，基于ddPCR方法，通过优选三种特异性的基因并设计相匹配的引物，优化扩增体系和条件，各步骤各条件相互配合，实现了准确特异地检测三种基因的表达情况的目的，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

第一方面，本发明提供一种用于辅助检测前列腺癌的ddPCR引物组合物，所述引物组合物包括针对PCA3基因的上下游引物，针对PSGR基因的上下游引物和针对MALAT1基因的上下游引物。