[发明专利]一种微生物菌肥联合该菌发酵液抑制根结线虫的方法

说明书

本发明公开了一种微生物菌肥联合该菌发酵液抑制根结线虫的方法，包括以下步骤：(1)制备发酵菌液、(2)制备菌肥、(3)施用底肥、(4)浇灌发酵菌液；本发明利用短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)制备发酵菌液和菌肥，并且采用将菌液和菌肥联合用药的方法，使短小芽孢杆菌以固态和液态的形式施用，促进短小芽孢杆菌在土壤中定植并最终形成优势菌群，二者有机结合从而对根结线虫病起到较好的防效。本发明减少了化学肥料和化学农药的使用，保护和促进了烟草的生长，促进环境友好。

技术领域

本发明属于生物农药技术领域，具体涉及利用短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)生产的菌肥联合该菌发酵液抑制根结线虫虫害的发生。

背景技术

烟草根结线虫病是我国烟草主要病害之一，不仅直接危害烟草，造成烟株萎蔫黄化，发育迟缓，甚至整株死亡，而且还会导致烟草黑胫病、青枯病等病害发生，降低烟草品种的抗性。我国云南、河南、山东等13个主要产烟区都有发生，局部地区危害严重，损失较重。烟草作为吸食品，其农药残留问题已经引起重视。化学杀线剂会造成烟叶中农药残留的增加，致使烟叶农药残留超标，从而成为我国烟草生产贸易中的一个难题，而且应用化学杀线剂对环境污染严重，使用过程中对人畜不安全，对环境有着极大的威胁，难以保证烟叶生产的可持续性发展和安全性，所以，一些原本效果很好的杀线剂已经停止生产或在部分地区禁用。而生物防治作为一种安全、有效的方法而越来越受到重视。

根结线虫生物防治天敌资源在世界不同国家和地区被广泛调查和筛选，其涉及的真菌按功能区分包括捕食真菌、内寄生真菌、机会真菌和产毒真菌。此外，专性寄生细菌以及根际的研究也成为根结线虫生物防治研究的热点之一。目前采用的主要方法就是将拮抗菌制成浓缩液体制剂、纯孢子粉剂或者复合固体粉剂，然后在烟苗移栽前施用。这些方法较为单一，由于生防菌株受到复杂土壤生态因子的影响，生防菌剂防效的稳定性得不到保证，防效不明显。而本项专利所采用的是“联合用药”的方法，使生防菌能够在土壤中定植并最终形成优势菌群，从而对根结线虫病起到较好的防效。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有采用单一拮抗菌剂(液)防治根结线虫病技术的不足。提供一种将该病害拮抗菌肥与拮抗菌剂联合防控病害的新技术。通过联合作用能够提高拮抗菌在土壤中的定植能力，有效提高其对的该病害的抗性。对改善烟田微环境，促进生物防治技术的发展具有重要意义。

为达上述目的，本发明采用以下技术方案：

1、制备发酵菌液

将固体保存的短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)采用改良产芽孢液体培养基进行发酵培养，得到发酵菌液。所述发酵菌液中有效活菌数≥1.0亿/g(cfu)。所述改良产芽孢液体培养基成分如下：葡萄糖1.5％、黄豆饼粉3.0％、蛋白胨0.2％、NaCl0.1％、(NH₄)₂SO₄1.0g、CaCO₃0.6％、MgSO₄·7H₂O 0.6％、ZnSO₄·7H₂O 0.02％，CuCl₂·2H₂O 0.005％，H₂O1000m1。

所述液体培养基和发酵菌液通过以下方法制备：分别称取上述组分并溶于1L蒸馏水中，待溶解后用pH计调节pH至6.8～7.2，将上述溶液装于三角瓶中放在灭菌锅中于121℃灭菌20分钟，待培养基冷却后用接种环沾取1ml短小芽孢杆菌转接到该培养基中，于37℃摇床100rpm振荡培养48hr。

2、制备菌肥