[发明专利]抗非洲猪瘟病毒和CD多克隆小分子抗体及制备方法和应用

权利要求书

1.一种抗非洲猪瘟病毒抗体的制备方法，所述抗非洲猪瘟病毒抗体为抗非洲猪瘟病毒IgY抗体和抗非洲猪瘟病毒和CD复合IgY抗体，其特征在于，包括以下步骤：

S1、制备抗原：将非洲猪瘟病毒抗原重组蛋白、表达非洲猪瘟病毒抗原蛋白的重组病毒和猪CD重组蛋白中的一种或多种加入弗氏佐剂，并置于高速匀浆器中高速匀化，得到免疫用的重组蛋白单价抗原、重组蛋白双价抗原、重组蛋白复合双价抗原和重组病毒单价抗原、重组病毒双价抗原、重组病毒复合双价抗原以及重组蛋白多价抗原以及重组病毒多价抗原；

S2、制备免疫蛋：利用步骤S1获得的重组蛋白单价抗原、重组蛋白双价抗原、重组蛋白复合双价抗原和重组病毒单价抗原、重组病毒双价抗原、重组病毒复合双价抗原以及重组蛋白多价抗原以及重组病毒多价抗原分别免疫产蛋鸡，每隔两周对产蛋鸡注射一次，注射2-5次，最后一次注射后的至少第12天后取产蛋鸡所产免疫蛋，并进行编码标记，得到抗非洲猪瘟病毒IgY免疫蛋和抗非洲猪瘟病毒和CD复合IgY免疫蛋；

S3、制备抗非洲猪瘟病毒IgY抗体和抗非洲猪瘟病毒和CD复合IgY抗体粗提物；

S4、制备抗非洲猪瘟病毒IgY抗体和抗非洲猪瘟病毒和CD复合IgY抗体纯品溶液；

S5、制备抗非洲猪瘟病毒IgY抗体和抗非洲猪瘟病毒和CD复合IgY抗体纯品干粉；

S6、制备抗非洲猪瘟病毒IgY抗体和抗非洲猪瘟病毒和CD复合IgY抗体纳米粉；

S7、制备抗非洲猪瘟病毒IgY抗体和抗非洲猪瘟病毒和CD复合IgY抗体脂质体液晶微囊。

2.根据权利要求1所述的抗非洲猪瘟病毒抗体的制备方法，其特征在于，所述非洲猪瘟病毒抗原重组蛋白为真核细胞或原核细胞表达并纯化的非洲猪瘟病毒代表性抗原蛋白；将非洲猪瘟病毒代表性抗原蛋白的基因插入病毒载体的基因组中，获得所述表达非洲猪瘟病毒抗原蛋白的重组病毒；所述非洲猪瘟病毒代表性抗原蛋白包括VP73、P54、P72、P30、A238L、CD2V中的至少一种；所述猪CD重组蛋白为真核细胞或原核细胞表达并纯化的代表性猪CD蛋白，所述代表性猪CD蛋白包括猪CD3蛋白、猪CD2蛋白、猪CD8蛋白中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的抗非洲猪瘟病毒抗体的制备方法，其特征在于，利用非洲猪瘟病毒抗原重组蛋白制备重组蛋白单价抗原和重组蛋白复合双价抗原，利用表达非洲猪瘟病毒抗原蛋白的重组病毒制备重组病毒单价抗原和重组病毒复合双价抗原，利用非洲猪瘟病毒抗原重组蛋白和猪CD重组蛋白制备重组蛋白双价抗原，利用表达非洲猪瘟病毒抗原蛋白的重组病毒和猪CD重组蛋白制备重组病毒双价抗原，利用非洲猪瘟病毒抗原重组蛋白、表达非洲猪瘟病毒抗原蛋白的重组病毒和猪CD重组蛋白制备重组蛋白多价抗原以及重组病毒多价抗原。

4.根据权利要求1所述的抗非洲猪瘟病毒抗体的制备方法，其特征在于，步骤S3中采用纯水提取法、氯仿萃取法、冷乙醇沉淀法或硫酸铵沉淀法制备抗非洲猪瘟病毒IgY抗体和抗非洲猪瘟病毒和CD复合IgY抗体粗提物。

5.一种抗非洲猪瘟病毒和CD多克隆小分子抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S8、将根据权利要求1-4所述的方法得到的抗非洲猪瘟病毒和CD复合IgY抗体纯品溶液调节pH至3.0-5.0，加入催化蛋白质酶；充分搅拌溶解，产生酶促反应，然后低温高速旋转离心，弃去沉淀得上清液，对上清液进行超滤，得到浓缩液；再将超滤后所获浓缩液进行凝胶层析，将层析收集物透析浓缩，得到抗非洲猪瘟病毒和CD多克隆小分子抗体。

6.根据权利要求5所述的抗非洲猪瘟病毒和CD多克隆小分子抗体的制备方法，其特征在于，还包括：

利用聚乙二醇、右旋糖苷或聚氨基酸长效化修饰步骤S7制备得到的抗非洲猪瘟病毒和CD多克隆小分子抗体，得到长效化的抗非洲猪瘟病毒和CD多克隆小分子抗体。

7.根据权利要求5所述的抗非洲猪瘟病毒和CD多克隆小分子抗体的制备方法，其特征在于，还包括：

采用天然来源的CPPs或人工合成的CPPs偶联抗非洲猪瘟病毒和CD多克隆小分子抗体，得到渗透细胞膜能力强的偶联的抗非洲猪瘟病毒和CD多克隆小分子抗体。