[发明专利]一种靶向CD19的新型嵌合抗原受体（CAR）及其应用

说明书

本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种靶向CD19的新型嵌合抗原受体(CAR)及其应用，该嵌合抗原受体包括信号肽、靶向CD19的纳米抗体、跨膜区、共刺激因子和胞内信号域，所述胞内信号域为突变的CD3ζ胞内信号域。使用靶向CD19的纳米抗体和突变的CD3ζ胞内信号域，不仅能够降低嵌合抗原受体的分子量，便于核酸转染和分子生物学操作，还能够提高抗肿瘤活性，发挥更强的肿瘤杀伤效果，为开发新型肿瘤免疫疗法提供了新的途径，可以用于CAR‑T疗法中，并展现出了良好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物制药领域，具体涉及一种靶向CD19的新型嵌合抗原受体(CAR)及其应用。

背景技术

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病之一，据不完全统计，目前中国的恶性肿瘤年发病病例达到400 多万例，其中淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤等血液肿瘤的发病率居高不下，并且近年来的研究表明，血液肿瘤的发病率不断提高，发病年龄也有所提前，发病人群从过去的以中老年人居多，逐步扩散到年轻患者中，这可能与现代人生活压力大、环境污染加剧、生活习惯不健康等因素有关。然而，目前对于血液肿瘤仍缺乏行之有效的治疗手段，传统的化学药物疗法、放射疗法和手术疗法难以产生令人满意的治疗效果，作为治疗血液肿瘤的首选疗法——造血干细胞移植，也存在较大的缺陷，如符合配型要求的造血干细胞难以获取，移植并发症较多，移植后复发率较高等等。因此，临床上迫切需要开发新型的血液肿瘤治疗手段，以便满足患者的需求。

过继性细胞免疫治疗(adoptive cell therapy，ACT)，是将具有抗肿瘤活性的免疫细胞输注给癌症患者,是一种高度个体化的癌症治疗新手段，而早期的细胞免疫疗法往往依赖于T细胞自身的表面相容性抗原，限制了其治疗范围。为了解决这一问题，嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor gene-modifiedT cell， CAR-T)技术应运而生，CAR-T细胞是将融合有CAR基因的核酸导入到自体或异体T淋巴细胞基因组中构建而成。嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)的发展经历了不同阶段，第一代CAR中不包括共刺激因子，因而T细胞的增殖效应小，细胞因子释放少，导致抗肿瘤活性不足；第二代CAR包含一个共刺激分子，临床上使用的共刺激因子包括CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、ICOS、NKG2C、 B7-H3等等，这些分子在调节T细胞增殖、存活和抗肿瘤效应方面发挥重要作用，从而使得第二代CAR-T 细胞可以被有效激活并杀死肿瘤细胞；第三代CAR具有两个共刺激分子，可进一步提高抗肿瘤效果。虽然 CAR-T细胞可以有效的杀死肿瘤细胞，但同时也带来了诸如免疫因子风暴、神经毒性、脱靶效应、移植抗宿主反应等不良反应，严重时可导致患者死亡，如Juno公司的JCAR015就曾导致了多例患者由于脑水肿而死亡的现象，为了应对这种棘手的不良反应事件，研究人员在CAR-T细胞中引入了Caspase 9等自杀基因，从而构建了第四代CAR，以便有效的控制治疗过程。