[发明专利]一种补体C1q测定试剂盒及其测定方法

权利要求书

1.一种补体C1q测定试剂盒，其特征在于：其原料如下：包括R1试剂和R2试剂。

2.一种根据权利要求1所述的补体C1q测定试剂盒的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1：R2试剂的配制，步骤如下：

1)取200ul的133nm的乳胶微球加入离心管中，加入1700ul的25mM的MES溶液，室温20-25℃条件下混匀25-35min；

2)加入1mg的EDC和3mg的NHS，在35-39℃的条件下，混匀时间12-18min；

3)离心去上清，加入1ml的5mM的CB溶液，超声重悬；

4)用1ml的5mM的CB溶液稀释0.8mg的C1q抗体，迅速加入到步骤2中的乳胶微球中，在35-39℃的条件下，混匀时间0.8-1.2h；

5)在步骤4中加入1ml的Glycine、1ml的BSA和3ml的Tris-HCL缓冲液进行封闭过夜，控制封闭过夜温度在2-8℃；

6)将步骤5中的溶液离心去上清，加入5ml的Tris-HCL缓冲液，并超声重悬和离心去上清；

7)在步骤6中加入50mM甘氨酸溶液保存，调整乳胶浓度为0.18％，即制得R2试剂；

S2：R1试剂的配制，步骤如下：

1)称取800ml的纯化水于容器中；

2)称量6-12g的Tris，加入容器中搅拌溶解并混匀；

3)称量10-20g的氯化钠，加入容器中搅拌溶解并混匀；

4)称量8-12ml的吐温20，加入容器中搅拌溶解并混匀；

5)称量25-35g的聚乙二醇，加入容器中搅拌溶解并混匀；

6)称量0.5-1.0ml的Proclin300，加入容器中搅拌溶解并混匀；

7)补充纯化水至步骤1中的配制体积(1000ml)，即制得R1试剂；

S3：将步骤S1中制得的R2试剂和步骤S2中制得的R1试剂进行混合反应，形成不溶性免疫复合物；

S4：反应液产生浊度并与样本补体C1q浓度成正比例上升，吸光度亦随之增加，与校准吸光度比较可计算出样品补体C1q浓度。

3.根据权利要求2所述的一种补体C1q测定试剂盒的测定方法，其特征在于：所述步骤S2中Tris溶液也可以为MES缓冲液和CB缓冲液中的任意一种。

4.根据权利要求2所述的一种补体C1q测定试剂盒的测定方法，其特征在于：所述步骤S2中吐温20溶液也可以为吐温80和Triton X100中的任意一种。

5.根据权利要求2所述的一种补体C1q测定试剂盒的测定方法，其特征在于：所述步骤S2中的聚乙二醇也可以为聚乙二醇8000和聚乙二醇10000中的任意一种。

6.根据权利要求2所述的一种补体C1q测定试剂盒的测定方法，其特征在于：所述步骤S2中的Proclin300也可以为叠氮钠和硫柳汞中的任意一种。

7.根据权利要求2所述的一种补体C1q测定试剂盒的测定方法，其特征在于：所述步骤S1中CB溶液、MES溶液和甘氨酸溶液的浓度在5mM至500mM。

8.根据权利要求2所述的一种补体C1q测定试剂盒的测定方法，其特征在于：所述步骤S1中BSA为牛血清白蛋白。

9.根据权利要求2所述的一种补体C1q测定试剂盒的测定方法，其特征在于：所述步骤S1中的步骤5和步骤6中Tris-HCL缓冲液均含有0.1％BSA和0.015％吐温20。

10.根据权利要求2所述的一种补体C1q测定试剂盒的测定方法，其特征在于：所述步骤S1中的步骤1中133nm的胶乳微球也可以为粒径60-240nm之间的胶乳微球的任意一种。