[发明专利]一种用于检测D型流感病毒D/660分支的荧光定量PCR检测材料及试剂盒在审
申请号: | 201910184009.5 | 申请日: | 2019-03-12 |
公开(公告)号: | CN109929948A | 公开(公告)日: | 2019-06-25 |
发明(设计)人: | 罗开健;张奇;冯赛祥;孙海亮;王晓冰;柳子巍;谢嘉渠;施建鑫 | 申请(专利权)人: | 华南农业大学 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
代理公司: | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人: | 胡辉 |
地址: | 510000 广东省广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 流感病毒 荧光定量PCR检测 材料及试剂 特异性荧光 后引物 前引物 探针 特异性荧光探针 淬灭基团 定量检测 荧光基团 经验证 检测 引物 | ||
本发明公开了一种用于检测D型流感病毒D/660分支的荧光定量PCR检测材料及试剂盒,材料中包括包括qPCR前引物、qPCR后引物和特异性荧光定量探针,其中,qPCR前引物序列为:GCAAAGAAGTTTCGGTCATTGTC;qPCR后引物序列为:CCAGTTTACCCCTTCATAAAATA;特异性荧光定量探针序列为:荧光基团‑AAAAGCCGACAACATCAACGAAGC‑淬灭基团。经验证表明使用本发明中的引物和特异性荧光探针结合本发明中提供的方法,可以实现对D型流感病毒的D/660分支的高特异性的定量检测。
技术领域
本发明属于生物技术领域,更具体地,涉及一种用于检测D型流感病毒D/660分支的荧光定量PCR检测材料及试剂盒。
背景技术
流感病毒是一种严重威胁人、畜健康的传染病。IDV是一种单股负链RNA病毒,具有7个基因组片段,编码9种蛋白质:糖蛋白血凝素-酯酶融合蛋白(HE);聚合酶PB2,PB1和P3;核蛋白;基质蛋白(M1和CM2),和非结构蛋白(NS1和NEP)。IDV与ICV有低于50%的蛋白质序列同一性。IDV与人ICV产生的血清之间没有交叉反应。在2014年国际病毒分类委员会执委会批准命名了一种新病毒—D型流感病毒,提议为正粘病毒科的新成员。
2011年IDV首次从患有呼吸道疾病的猪中分离出,随后在美国、法国、日本、中国、爱尔兰等多个地区都有所报道。D型流感病毒分为两个分支D/OK和D/660,若能确定是属于D型流感病毒的哪个分支,能够及时的预防治疗,减少经济损失。血清学研究表明至少从2004年以来IDV存在于肉牛中。犊牛的母体抗体水平在6个月后降低,刚断奶的犊牛似乎最容易感染。牛被认为是IDV的天然宿主。研究表明鸡和火鸡没有感染IDV,但是来自人血清样本的血清学证据发现,人的血清能检测到阳性,所以IDV可能具有潜在的公共健康风险。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种迅速准确,能极大缩短检测周期的用于检测D型流感病毒D/660分支的荧光定量PCR材料。
本发明另一要解决的技术问题是提供一种用于检测D型流感病毒D/660分支的荧光定量PCR检测试剂盒。
本发明还一要解决的技术问题是提供上述荧光定量PCR检测试剂盒的检测方法。
本发明的目的通过以下技术方案予以实现:
提供一种用于检测D型流感病毒D/660分支的荧光定量PCR材料,包括qPCR前引物、qPCR后引物和特异性荧光定量探针,
qPCR前引物序列为:
GCAAAGAAGTTTCGGTCATTGTC(SEQ ID NO.1)
qPCR后引物序列为:
CCAGTTTACCCCTTCATAAAATA(SEQ ID NO.2)
特异性荧光定量探针序列为:
荧光基团-AAAAGCCGACAACATCAACGAAGC-淬灭基团(SEQ ID NO.3)
优选地,所述特异性荧光定量探针的荧光基团为FAM荧光基团;所述猝灭基团为BHQ1淬灭基团。
提供一种用于检测D型流感病毒D/660分支的荧光定量PCR检测试剂盒,包括反转录酶与抑制剂、荧光定量PCR酶混合液,阳性对照样品、阴性对照样品和ddH2O,其中荧光定量PCR酶混合液中包括上述的荧光定量PCR检测材料。
优选地,所述qPCR前引物、qPCR后引物的浓度为10μmol/L,所述特异性荧光定量探针的浓度为10μmol/L。
进一步地,所述阳性对照为含有所述qPCR前引物与所述qPCR后引物扩增片段的18-T载体质粒溶液。
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