[发明专利]一种鸡Nrf2蛋白抗体及其免疫原、免疫原性多肽、检测试剂盒和应用

说明书

一种鸡Nrf2蛋白抗体及其免疫原、免疫原性多肽、检测试剂盒和应用，属于病毒免疫学技术领域。针对现有技术中缺乏有效检测鸡Nrf2蛋白表达情况的抗体和相关检测试剂盒，本发明提供了一种免疫原性多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。将该段免疫原性多肽通过偶联剂与载体蛋白偶联获得免疫原，并利用该免疫原与佐剂混合乳化后免疫接种兔，取免疫后兔的血液经纯化后制备获得的鸡Nrf2蛋白抗体，此外还提供了一种检测鸡Nrf2蛋白的ELISA检测试剂盒。本发明还可用于监测鸡Nrf2蛋白在细胞内的表达和分布。

技术领域

本发明属于病毒免疫学技术领域，具体涉及一种鸡Nrf2蛋白抗体及其免疫原、免疫原性多肽、检测试剂盒和应用。

背景技术

细胞内氧化还原平衡对于机体健康具有重要且复杂的影响。一方面，能量代谢催生大量活性氧自由基，这些活性氧自由基在体内的积累严重损伤细胞，是造成衰老、过敏反应、糖尿病、肝脏疾病和心血管疾病等众多疾病的病理生理基础。另一方面，当病原微生物侵染机体时，细胞将触发适当水平的氧化应激反应，产生的活性氧不但可以直接杀伤病原体，还可以间接诱发调控机体先天免疫应答系统。为了确保在细胞内外环境发生变化时机体能够及时精确地调控细胞氧化还原过程，细胞内形成了一套以转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2，也称NFE2L2)为核心调控因子的复杂的氧化应激应答系统。作为机体维持细胞内氧化还原稳态的中枢调节者，Nrf2以转录调控因子的方式，在细胞核通过内与Ⅱ相解毒酶启动子区域ARE结合，调控一系列氧化应激相关酶及抗氧化蛋白的基因的表达，包括还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NAD(P)H)、氧化还原酶(NQO1)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、过氧化物酶(POD)、谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCL)、谷胱甘肽环氧化物水解酶(EH)和血红素氧化酶(HO-1)等，使细胞处于稳定状态，维持机体氧化还原动态平衡。

目前已知鸡Nrf2蛋白氨基酸序列，其在GenBank中序列号为BAA08364.1，由582个氨基酸组成。然而，Nrf2相关研究集中在人和哺乳类动物，禽类包括鸡Nrf2研究基本空白。尚未有识别鸡Nrf2蛋白的抗体和合适的试剂能检测鸡Nrf2蛋白的表达与分布情况。

发明内容

针对现有技术中缺乏有效检测鸡Nrf2蛋白表达情况的抗体和相关检测试剂盒，本发明提供了一种免疫原性多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明还提供了一种用于获得鸡Nrf2蛋白抗体的免疫原，是由氨基酸序列如SEQID NO：1所示的免疫原性多肽通过偶联剂与载体蛋白偶联获得的。

本发明还提供了一种鸡Nrf2蛋白抗体，是以上述的免疫原与佐剂混合乳化后免疫接种兔，取免疫后兔的血液经纯化后制备获得的。

本发明还提供了上述鸡Nrf2蛋白抗体的制备方法，包括如下步骤：

1)制备免疫原：将氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的多肽，通过偶联剂与载体蛋白偶联，得到鸡Nrf2免疫原；

2)免疫接种：将步骤1)获得的鸡Nrf2免疫原与佐剂混合乳化后，接种兔进行免疫；

3)在接种一个月后，参照首次免疫使用的剂量减半进行二次免疫；

4)制备粗抗体：二次免疫一个月后，在无佐剂条件下静脉注射鸡Nrf2免疫原，注射剂量为0.1-1mg/只，此后，每隔两周进行加强免疫，累计加强免疫2-5次，每次加强免疫1周后取兔血进行离心，收集上清液，获得鸡Nrf2蛋白粗抗体；

5)纯化抗体：将氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的多肽偶联到柱中预先活化的巯基蛋白琼脂糖偶联树脂上制备抗原亲和柱，然后用PBS缓冲液进行柱平衡；将过滤后的鸡Nrf2蛋白粗抗体加入平衡后的抗原亲和柱，而后用PBS缓冲液再次进行柱平衡，经洗脱后制备获得鸡Nrf2蛋白抗体。