[发明专利]一种分泌表达多抗原表位猪瘟病毒E2基因的重组病毒及制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种分泌表达多抗原表位猪瘟病毒E2基因的重组病毒及制备方法与应用。本发明根据密码子的偏爱性，人工设计合成了含多个抗原表位的重组CSFV C株的免疫原性基因E2并构建了含有上述E2基因的重组杆状病毒，提高了E2基因在杆状病毒中表达水平和免疫原性。利用本发明的重组杆状病毒所表达rE2蛋白制备亚单位疫苗，免疫日猪后，可诱导机体产生特异性免疫反应，并免受CSFV石门株的攻击；同时所述亚单位疫苗免疫动物后，还可用于鉴别诊断区分疫苗免疫和野毒感染动物，具有较大的应用前景。

技术领域

本发明涉及兽医生物技术领域，更具体地，涉及一种分泌表达多抗原表位猪瘟病毒E2基因的重组病毒及制备方法与应用。

背景技术

猪瘟(Classical Swine Fever，CSF)是由黄病毒科瘟病毒属猪瘟病毒(ClassicalSwine Fever Virus，CSFV)引起的一种高度接触性、出血性和致死性传染病，是世界范围内危害养猪业最重要的传染病之一，多年来一直是猪病防治研究的重点。我国由于长期贯彻预防为主的指导方针，坚持全面接种猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)，本病在国内大规模爆发已基本停止，但是在全国各地仍有不间断的散发流行，造成巨大的经济损失。E2蛋白是诱导机体产生中和抗体的主要保护性抗原主要成分，可以抵抗强毒的攻毒保护实验，是构建猪瘟新型基因工程疫苗的首选靶蛋白。利用CSFV E2蛋白制备的亚单位疫苗没有非结构蛋白，可以利用检测Erns蛋白的抗体来区分疫苗免疫和野毒感染猪群。尽管猪瘟兔化弱毒疫苗能有效的预防不同基因亚型病毒的感染，但是猪瘟仍在部分区域呈流行态势，并存在代毒与免疫临床发病现象。猪瘟作为我国优先防治的一类动物传染病，仍迫切需要便于鉴别诊断的新型基因工程标记疫苗以及配套的诊断试剂。

近年来，杆状病毒表达载体因其具有操作简单、安全性高，可容纳大的目的基因，表达外源蛋白效率高，有翻译后修饰的作用，表达蛋白的免疫原性、生物活性与天然的蛋白相似等优点，已经在表达载体上占了主导的地位。利用杆状病毒表达载体表达多抗原表位的猪瘟E2蛋白，制备亚单位疫苗，能有效预防猪瘟病毒感染，也有利于与野毒感染进行鉴别诊断。专利201810920169.7公开了一种杆状病毒表达的猪瘟E2亚单位疫苗，该疫苗是通过杆状病毒表达系统表达的含有信号肽的猪瘟SP-E2蛋白，虽然提高了E2蛋白的表达量，但是其免疫原性依然有待提高。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有猪瘟E2亚单位疫苗存在的缺陷和不足，提供一种分泌表达多抗原表位猪瘟病毒E2基因的重组病毒，并利用所述重组病毒表达的rE2蛋白制备亚单位疫苗，免疫日猪后，可诱导机体产生特异性免疫反应，并免受CSFV石门株的攻击。

本发明的第一个目的是提供一种人工修饰的含多抗原表位的猪瘟病毒重组E2基因。

本发明的第二个目的是提供一种人工修饰的含多抗原表位的猪瘟病毒重组E2蛋白。

本发明的第三个目的是提供一种含有上述重组E2基因的杆状病毒转移载体。

本发明的第四个目的是提供一种含有上述载体的重组杆状病毒。

本发明的第五个目的是提供所述重组杆状病毒在制备猪瘟病毒亚单位疫苗中的应用。

本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：

一种人工修饰的含多抗原表位的猪瘟病毒重组E2基因，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

本发明参照CSFV C株序列，根据杆状病毒密码子偏好性人工合成1272bp的含四个重复E2蛋白抗原表位的重组E2(rE2)基因序列(SEQ ID NO.1)；其中表位序列为“TAVSPTTLR”，具体为于E2基因的氨基端引入两个重复表位，于羧基端引入两个重复表位，组成含四个重复E2蛋白抗原表位的重组E2(rE2)基因序列且于rE2基因的C端引入6his序列作为标签。

一种人工修饰的含多抗原表位的猪瘟病毒重组E2蛋白，其氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。