[发明专利]一种酶联免疫法检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于，包括亲和素包被的微孔板、生物素标记的HbsAb、生物素标记的HCV基因重组抗原、生物素标记的HIV基因重组抗原、辣根过氧化物酶标记的HbsAb、辣根过氧化物标记的鼠抗人IgG、辣根过氧化物酶标记的HIV基因重组抗原、底物A液、底物B液、浓缩洗涤液和终止液。

2.根据权利要求1所述的一种酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：所述微孔板为聚苯乙烯微孔板。

3.根据权利要求2所述的一种酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：所述底物A液为含2％过氧化氢的柠檬酸盐缓冲液。

4.根据权利要求3所述的一种酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：所述底物B液为含0.02％TMB的柠檬酸盐缓冲液。

5.根据权利要求4所述的一种酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：所述浓缩洗涤液为含5％NaCl、0.05％KCl和5％Tween-20的0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.3±0.1)。

6.根据权利要求5所述的一种酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于：所述终止液为1MH₂SO₄溶液。

7.一种如权利要求1～6任一所述的酶联免疫法检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a)包被板的制备和封装；

b)酶结合物的制备和分装：将辣根过氧化物酶标记的HBsAb、鼠抗人IgG、HIV基因重组抗原分别用含0.12‰绿色素的酶标稀释液，质检合格后用平头盖塑料瓶(蓝色)，按11ml/瓶分装，贴签，置2～8℃半成品库保存；

c)样品稀释液制备和分装：按样品稀释液配方配制好样品稀释液，质检合格后用平头盖塑料瓶(白色)，按11ml/瓶分装，贴签，置2～8℃半成品库保存；

d)底物A液制备和分装：含2％过氧化氢的柠檬酸盐缓冲液，质检合格后用绿盖滴瓶按6ml/瓶分装，贴签，置2～8℃半成品库保存；

e)底物B液制备和分装：含0.02％TMB的柠檬酸盐缓冲液，质检合格后用黑盖滴瓶(黑色)按6ml/瓶分装，贴签，置2～8℃半成品库保存；

f)浓缩洗涤液制备和分装：含5％NaCl、0.05％KCl和5％Tween-20的0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.3±0.1)；用平头盖塑料瓶(透明)按30ml/瓶分装，贴签，置2～8℃半成品库保存；

g)终止液制备和分装：1M H₂SO₄溶液，用黄盖滴瓶按6ml/瓶分装，贴签，置2～8℃半成品库保存。

h)对半成品库中的包被板及各封装液进行QA取样并装盒至成品库中保存，待进一步QA取样合格后放行。

8.根据权利要求7所述的酶联免疫法检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述步骤a)中包被板的制备和封装包括以下步骤：

1)包被：将亲和素按确定的工作浓度用0.05M碳酸盐缓冲液(pH9.6±0.1)稀释。经检验合格的微孔板划棕色标记后包被，包被量100±5μl/孔，于33～37℃吸附过夜(16～26小时)；

2)洗板：用工作浓度洗液按300±50μl/孔不浸泡连续洗板2次；

3)封闭：用封闭液以120±5μl/孔33～37℃封闭3～6小时；

4)干燥及封装：甩板，扣干，干燥；经干燥处理确认干透后立即用复合膜卷材或铝膜袋加干燥剂进行封装，并保证铝膜袋封袋密实，完整，并贴上标签，置2～8℃半成品库保存。

9.根据权利要求8所述的酶联免疫法检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述封闭液按质量比由以下材料制成：硼酸(H₃BO₃)3.92g、硼砂(Na₂B₄O₇.10H₂O)3.26g、蔗糖50g、BSA10g、Proclin300 1ml、加纯化水至1000ml。