[发明专利]高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法

说明书

本发明公开了一种高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法，包括：采用甲醇溶解奥氮平配制多个浓度的标准曲线工作液，采用甲醇溶解稳定同位素内标物配制成内标物工作液；将0‑5μL多个浓度的标准曲线工作液分别加入空白血浆补足至100μL，涡旋制成多个浓度的标准曲线血浆样品，加入内标物工作液，离心，取上清液，进行LC‑MS/MS定量分析，绘制标准曲线；精密吸取100μL的待测血浆，加入内标物工作液，离心，取上清液，进行LC‑MS/MS定量分析，在所述标准曲线上读取奥氮平浓度。本发明具有样本前处理简单方便、分析时间短、所需样本体积少、灵敏度高、回收率高、基质效应小等特点。

技术领域

本发明涉及检测药物浓度的方法。更具体地说，本发明涉及一种高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法。

背景技术

奥氮平(Olanzapine)是美国Eli Lilly制药公司于1996年开发上市的一种非典型性抗精神病药。化学名为为2-甲基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)-10H-噻吩并[2,3-b][1,5]苯二氮杂，分子式为C17H20N4S，分子量为456.32。奥氮平是二代抗精神病药物，是一种作用于多种受体系统，例如5-HT受体及组胺受体。奥氮平主要经过肝脏细胞色素P450酶代谢(如CYP4501A2)和谷氨酸转移酶等。

对于小分子化合物的定量测定，高效液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)已经成为主要的检测方法，广泛应用于临床前和临床生物样本定量测定。LC-MS/MS方法具有高效、快速、灵敏、普适等优势，成为目前抗精神类药物的主要分析手段。目前，文献已报道的 LC-MS/MS法测定生物基质中奥氮平的浓度主要应用于治疗药物监测(TDM)领域，具有较宽的线性范围(如5-500nM、0.25-50ng/mL、1-300ng/mL)，而且不能满足临床试验对生物样本检测限、质量控制及样本处理效率的要求。另外，已公布的方法还存在诸如样本体积大(0.2-0.5mL/样本)、每个样本的分析时间长(6-11min)、定量下限较高(如1-5 ng/mL)、样本前处理采用费时费力的液液萃取法和固相萃取法。尽管也有文献报道有些 LC-MS/MS方法采用蛋白沉淀法，然而，这些蛋白沉淀的过程尚需要干燥、复溶等操作，显著降低了生物样本前处理的效率，对临床药代动力学/生物等效性研究中大量血浆/血清样本的高通量处理提出了挑战。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法，其具有样本前处理简单方便、分析时间短、所需样本体积少、灵敏度高、回收率高、基质效应小等特点。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法，包括：

采用甲醇溶解奥氮平配制多个浓度的标准曲线工作液，采用甲醇溶解稳定同位素内标物配制成内标物工作液；

将0-5μL多个浓度的标准曲线工作液分别加入空白血浆补足至100μL，涡旋制成多个浓度的标准曲线血浆样品，加入300-400μL内标物工作液，0-4℃下离心，取上清液，进行LC-MS/MS定量分析，以血浆样品中奥氮平浓度为横坐标，以奥氮平峰面积与稳定同位素内标物峰面积的比值为纵坐标，绘制线性范围为0.1-20ng/mL的标准曲线；

精密吸取100μL的待测血浆，加入绘制标准曲线时等量的内标物工作液，0-4℃下离心，取上清液，进行LC-MS/MS定量分析，在所述标准曲线上读取测得的奥氮平峰面积与内标物峰面积的比值对应的奥氮平浓度；