[发明专利]一种快速检测奶牛子宫内膜炎中病原菌的方法有效
申请号: | 201910186379.2 | 申请日: | 2019-03-12 |
公开(公告)号: | CN109706257B | 公开(公告)日: | 2022-05-27 |
发明(设计)人: | 李勤凡;王宁宁;王晶;范玉堂;许信刚 | 申请(专利权)人: | 西北农林科技大学 |
主分类号: | C12Q1/689 | 分类号: | C12Q1/689;C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/04;C12R1/19;C12R1/445;C12R1/465;C12R1/385;C12R1/37;C12R1/01 |
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地址: | 712100 陕*** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 快速 检测 奶牛 子宫 内膜 病原菌 方法 | ||
1.PCR引物系统在制备检测奶牛子宫内膜炎致病菌试剂中的用途,其特征在于,所述PCR引物系统包括:
1)扩增大肠埃希菌(E.coli)特异性序列的引物SEQ ID No:1和SEQ ID No:2;
2)扩增金黄色葡萄球菌(S.aureus)特异性序列的引物SEQ ID No:3和SEQ ID No:4;
3)扩增化脓隐秘杆菌(T.pyogenes)特异性序列的引物SEQ ID No:5和SEQ ID No:6;
4)扩增乳房链球菌(S.uberis)特异性序列的引物SEQ ID No:7和SEQ ID No:8;
5)扩增奇异变形杆菌(P.mirabilis)特异性序列的引物SEQ ID No:9和SEQ ID No:10;
6)扩增铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)特异性序列的引物SEQ ID No:11和SEQ ID No:12;
检测奶牛子宫内膜炎致病菌的方法步骤为:
1)细菌基因组DNA的提取:采用试剂盒方法提取培养过夜的子宫分泌物中的大肠埃希菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、化脓隐秘杆菌(T.pyogenes)、乳房链球菌(S.uberis)、奇异变形杆菌(P.mirabilis)、铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)的DNA;
2)多重PCR:在含有上述细菌DNA的反应体系中,加入上述的PCR引物系统进行扩增;
3)电泳紫外成像:配制2%琼脂糖凝胶进行凝胶电泳,电压:120V,时间:45min,随后进行电泳紫外成像。
2.根据权利要求1所述的PCR引物系统在制备检测奶牛子宫内膜炎致病菌试剂中的用途,其特征在于,所述PCR引物系统进行扩增的条件为: 94℃5min;94℃30s,54℃30s,72℃80s,30个循环;72℃10min。
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