[发明专利]一种快速检测奶牛子宫内膜炎中病原菌的方法有效

专利信息
申请号: 201910186379.2 申请日: 2019-03-12
公开(公告)号: CN109706257B 公开(公告)日: 2022-05-27
发明(设计)人: 李勤凡;王宁宁;王晶;范玉堂;许信刚 申请(专利权)人: 西北农林科技大学
主分类号: C12Q1/689 分类号: C12Q1/689;C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/04;C12R1/19;C12R1/445;C12R1/465;C12R1/385;C12R1/37;C12R1/01
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 712100 陕*** 国省代码: 陕西;61
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摘要:
搜索关键词: 一种 快速 检测 奶牛 子宫 内膜 病原菌 方法
【权利要求书】:

1.PCR引物系统在制备检测奶牛子宫内膜炎致病菌试剂中的用途,其特征在于,所述PCR引物系统包括:

1)扩增大肠埃希菌(E.coli)特异性序列的引物SEQ ID No:1和SEQ ID No:2;

2)扩增金黄色葡萄球菌(S.aureus)特异性序列的引物SEQ ID No:3和SEQ ID No:4;

3)扩增化脓隐秘杆菌(T.pyogenes)特异性序列的引物SEQ ID No:5和SEQ ID No:6;

4)扩增乳房链球菌(S.uberis)特异性序列的引物SEQ ID No:7和SEQ ID No:8;

5)扩增奇异变形杆菌(P.mirabilis)特异性序列的引物SEQ ID No:9和SEQ ID No:10;

6)扩增铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)特异性序列的引物SEQ ID No:11和SEQ ID No:12;

检测奶牛子宫内膜炎致病菌的方法步骤为:

1)细菌基因组DNA的提取:采用试剂盒方法提取培养过夜的子宫分泌物中的大肠埃希菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、化脓隐秘杆菌(T.pyogenes)、乳房链球菌(S.uberis)、奇异变形杆菌(P.mirabilis)、铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)的DNA;

2)多重PCR:在含有上述细菌DNA的反应体系中,加入上述的PCR引物系统进行扩增;

3)电泳紫外成像:配制2%琼脂糖凝胶进行凝胶电泳,电压:120V,时间:45min,随后进行电泳紫外成像。

2.根据权利要求1所述的PCR引物系统在制备检测奶牛子宫内膜炎致病菌试剂中的用途,其特征在于,所述PCR引物系统进行扩增的条件为: 94℃5min;94℃30s,54℃30s,72℃80s,30个循环;72℃10min。

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