[发明专利]一种源于鹿茸软骨的microRNA及其应用

说明书

一种源于鹿茸软骨的microRNA及其应用，它涉及一种小RNA(microRNA)，本发明提供了来源于东北马鹿(Cervus elaphus)鹿茸软骨并对细胞起抑制作用的因子，其命名为：microRNA PC‑5p‑2869，其序列为CGCAUUGGUGGUUCAGUGG，具有高效下调EEF1A1蛋白表达的作用，可抑制细胞增殖、迁移和侵袭。

技术领域

本发明涉及一种小RNA(microRNA)，负调控细胞的增值、迁移和侵袭。

背景技术

在哺乳动物中，只有鹿茸角是目前所知唯一具有表形态再生能力的器官，即在失去后还能完全再生出来。在再生周期里，鹿茸从顶部生长点平均每天延伸1-2cm，又会在近百天的快速生长后最终自动停止，茸性皮肤会慢慢死亡脱落。鹿茸角再生机理复杂，目前仍然是再生生物学的重要研究模型。

MicroRNA(miRNA)是一类内生的、长度为18-24个核苷酸、重要的基因表达的负调控因子，通过调节目标基因mRNA稳定性或翻译效率来表现其功能。其来源于长的具有发卡样二级结构的转录子，并被两种核酸内切酶Drosha和Dicer剪切，形成双链的miRNA。其中一条链形成成熟的miRNA而另一条链降解。成熟miRNA通过与靶标基因mRNA的3’非翻译区(Untranslated Regions，UTR)目标位点结合而对其进行调控。一个miRNA的选择性活性依赖于与这个同源mRNA互补的miRNA的种子序列(seed region)(图1所示)。因为microRNA 种子内的不完美碱基配对代表这个核心5-7核苷酸序列可以潜在识别结合很多的mRNA序列，一个miRNA同时调控几百个目标基因的mRNA。证据表明miRNA在很多细胞的增殖、分化、器官形态发生和肿瘤发生等生物学过程中起非常关键的调节作用。miRNA通过抑制目标基因起到癌基因或肿瘤抑制的作用来参与调节肿瘤发生和发展。目前，越来越多的miRNA 被证明在癌症发生过程中发挥非常重要的作用，这说明miRNA可以作为治疗癌症的潜在新靶标。

真核翻译延伸因子1Alpha1(Eukaryotic Translation Elongation Factor1Alpha 1，EEF1A1) 是参与蛋白质翻译延伸的重要蛋白，具有触发翻译延伸启动的作用。EEF1A1是真核细胞中高度保守的GTP结合蛋白，在蛋白质合成过程中起着重要作用。研究表明，EEF1A1在细胞中发挥重要作用，调节细胞的各种生物学特性，如细胞周期、细胞生长和细胞死亡；EEF1A1在许多肿瘤组织中异常上调，EEF1A1的过度表达与癌症细胞增殖密切相关，下调EEF1A1表达可抑制许多肿瘤细胞增殖。

发明内容

本发明确定了东北马鹿(Cervus elaphus)鹿茸软骨来源的，通过EEF1A1介导抑制细胞增殖、迁移和侵袭的负调控因子，并确定这种因子的名称、序列。本发明从马鹿鹿茸软骨组织的microRNA数据库中筛选得到的microRNA PC-5p-2869(简称miRNA PC-2869)，是一种在鹿茸软骨中特异性表达的miRNA，长度19nt。序列如SEQ ID NO：1所示(CGCAUUGGUGGUUCAGUGG)。

本发明经过293T、MG63等细胞的细胞增殖、迁移、侵袭检测和Western Blotting等实验证明miRNA PC-2869下调细胞增殖关键转录因子EEF1A1的表达(图2、3、4所示)，并可介导抑制细胞增殖(图5、6所示)、迁移(图7、8所示)和侵袭(图9、10所示)。

本发明包含以下有益效果：

作为基因表达的负调控因子，microRNA在细胞生长、器官发育、个体生长及各种疾病的进程中都起到非常重要的作用。从快速生长的鹿茸顶端软骨组织中分离出来的microRNA对鹿茸的再生生长会起非常重要的调控作用。