[发明专利]一种鉴定趋黄库蠓的试剂盒及方法有效
| 申请号： | 201910186463.4 | 申请日： | 2019-03-13 |
| 公开（公告）号： | CN109706251B | 公开（公告）日： | 2022-03-11 |
| 发明（设计）人： | 闫冀焕;林妙端;肖颖;谢婧;沈军;黄恩炯;张灵玲;李云;史玲莉;高志云;刘晓辉;廉国胜;田洁;慈颖;王胜启;张苗;石顺利;兰景;李薇;付晓昀 | 申请（专利权）人： | 河北国际旅行卫生保健中心 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 长沙星耀专利事务所(普通合伙) 43205 | 代理人： | 舒欣 |
| 地址： | 050091 河北*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴定 趋黄库蠓 试剂盒 方法 | ||
1.一种鉴定趋黄库蠓的分子标记，其特征在于，所述分子标记由SEQ ID NO:5所示核苷酸序列的CO I基因和SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的Cyt b基因组成。
2.一种鉴定未知库蠓是否为趋黄库蠓的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)提取未知库蠓的总DNA；
2)利用第一引物组和第二引物组分别以步骤1)获取的总DNA为模板进行PCR扩增；所述第一引物组由SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的第一上游引物和SEQ ID NO:2所示核苷酸序列的第一下游引物组成，所述第二引物组由SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的第二上游引物和SEQ ID NO:4所示核苷酸序列的第二下游引物组成；
3)对第一引物组的扩增产物和第二引物组的扩增产物分别进行测序，如果第一引物组扩增得到的序列与SEQ ID NO:5具有98％以上的相似性，并且第二引物组扩增得到的序列与SEQ ID NO:6具有98％以上的相似性，则该未知库蠓为趋黄库蠓。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，2)中利用第一引物组进行PCR扩增的PCR反应体系为25μL，其中：模板DNA 1μL，第一上游引物0.5μL，第一下游引物0.5μL，2×Mastermix 4.25μL，加ddH2O至终体积25μL。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤2)中利用第一引物组进行PCR扩增的PCR反应程序如下：94℃预变性3min；94℃变性45s，48℃退火60s，72℃延伸60s，35个循环；72℃延伸10min。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，2)中利用第二引物组进行PCR扩增的PCR反应体系为25μL，其中：模板DNA 1μL，第二上游引物0.5μL，第二下游引物0.5μL，2×Mastermix 4.25μL，加ddH2O至终体积25μL。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤2)中利用第二引物组进行PCR扩增的PCR反应程序如下：94℃预变性3min；94℃变性45s，48℃退火60s，72℃延伸60s，35个循环；72℃延伸10min。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在2)中利用第一引物组和第二引物组同时以步骤1)获取的总DNA为模板进行PCR扩增。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的PCR反应体系为25μL，其中：模板DNA 1μL，第一上游引物0.5μL，第二下游引物0.5μL，第二上游引物0.5μL，第二下游引物0.5μL，2×Mastermix 4.25μL，加ddH2O至终体积25μL，
所述PCR扩增的PCR反应程序如下：94℃预变性3min；94℃变性45s，48℃退火60s，72℃延伸60s，35个循环；72℃延伸10min。
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