[发明专利]鉴定甘蓝表皮毛有无的分子标记及其开发方法和应用

权利要求书

1.鉴定甘蓝表皮毛有无的分子标记Bol.trichome-CAPS.02，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.如权利要求1所述的鉴定甘蓝表皮毛有无的分子标记Bol.trichome-CAPS.02的开发方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)以一份无毛甘蓝与一份有毛野生甘蓝B.incana杂交产生F₁代，F₁代自交获得F₂代植株，根据F₂代植株中无毛和有毛性状的分离比例，判定控制该野生甘蓝的表皮毛性状的基因类型；

2)利用F₂代植株中的无性系F₂群体构建甘蓝遗传连锁图谱，并将表皮毛基因定位到甘蓝C01染色体上一段4.3cM的区间；

3)从F₂群体中挑选相同数目的无表皮毛和有表皮毛的植株，对亲本和极端混池进行全基因组重测序，根据Takagi等方法，采用Δ(SNP-index)法鉴定与甘蓝表皮毛性状显著相关的差异热点区域，同时结合上述QTL定位结果，最后将甘蓝表皮毛性状定位在甘蓝C01染色体上1.04Mb的区间内；

4)通过与拟南芥的同源比对和基因注释信息，在上述区间内发现一个候选基因BolTRY-l，该基因与拟南芥调控表皮毛基因AthTRY具有类似功能，qRT-PCR分析显示，F₂群体中候选基因BolTRY-l在无毛植株的表达量显著高于有毛植株；

5)进一步克隆有毛甘蓝和无毛甘蓝BolTRY-l基因的CDS，序列比对发现，二者的CDS序列存在SNP。

3.表皮毛有无的甘蓝品种鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以待鉴定甘蓝DNA为模板，扩增分子标记，引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2和SEQID No.3所示；

(2)扩增产物利用限制性酶HinfI进行酶切，酶切后进行凝胶电泳，获得271-bp、185-bp、158-bp、131-bp和27-bp五种特异条带；

(3)出现271-bp、158-bp、131-bp和27-bp四种特异条带的甘蓝植株，为纯合的有毛个体，出现271-bp、185-bp和131-bp三种条带的，为纯合的无毛植株，同时出现五种特异条带的为杂合个体。

4.如权利要求1所述的鉴定甘蓝表皮毛有无的分子标记Bol.trichome-CAPS.02在甘蓝表皮毛有无的遗传育种中的用途。

5.如权利要求1所述的鉴定甘蓝表皮毛有无的分子标记Bol.trichome-CAPS.02在选育表皮毛有无的甘蓝品种中的用途。

6.如权利要求3所述的甘蓝品种鉴定方法在甘蓝表皮毛有无的遗传育种中的用途。

7.如权利要求3所述的甘蓝品种鉴定方法在选育表皮毛有无的甘蓝品种中的用途。