[发明专利]一种离心筛选具有高含油率油脂酵母菌株的方法及其应用

说明书

本发明公开了一种离心筛选具有高含油率油脂酵母菌株的方法及其应用，属于生物技术和微生物技术领域。具体步骤为将油脂酵母菌株培养在木质纤维素水解液中，通过离心发酵液获取上层包含高油脂含量的轻油脂细胞转接后继续培养，并逐步提高离心力直到菌株发酵性能达到稳定。筛选得到新菌株命名为皮状丝孢酵母MS28,其保藏编号为CGMCC No.14780。本发明快速高效，对所有油脂酵母菌株筛选均具有重要借鉴意义。

【技术领域】

本发明涉及生物技术和微生物技术领域，一种离心筛选具有高含油率油脂酵母菌株的方法及其应用。

【背景技术】

油脂是生产高能量密度生物燃料比如生物柴油或者航空燃料的重要前提物质。来自于大豆油菜籽，向日葵或者棕榈的植物油是进行生物柴油和航空燃料生产的主要来源。然而，极大的生物柴油市场需求需要稳定快速的底物供应。可再生的木质纤维素是非常适宜的原料来源进行发酵法生产生物柴油。

发酵菌株是影响油脂生产的关键因素，其应该具有高木质纤维素来源抑制物的耐受性，多种碳源利用行为和高油脂富集能力。因此，菌株选育尤为重要。油脂酵母菌株选育方法主要包括浅蓝菌素染色筛选，直接油脂测重筛选，微型生物反应器筛选和漂浮细胞筛选。而人工智能辅助的高通量筛选尽管增加了筛选效率但仍远低于细胞数，通常仅有1％的细胞得到筛选，而且后续的称重油脂测定极大延迟了整个筛选速率。

本发明提出了一种基于离心过程中细胞密度差异性分布的原理简单快速筛选含油率高的轻油脂细胞菌株。此方法的应用不仅可以简化常规筛选的繁琐过程也可以极大提升高产油脂细胞的筛选效率。

【发明内容】

本发明的目的在于提供一种离心筛选具有高含油率油脂酵母菌株的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种离心筛选具有高含油率油脂酵母菌株的方法及其应用，其具体步骤为：

(1)将亲本菌株以10％接种量接种于50ml 15％玉米秸秆水解液中，在30℃和180rpm条件下培养72h，其添加营养盐组分包括1.0 g/L KH₂PO₄,0.5g/L酵母提取物,0.5g/LMgSO₄ 7H₂O,0.22g/L (NH₄)₂SO₄；

(2)取25ml发酵液在一定离心力下离心2min，并吸取5ml 发酵液最上层清液转至新鲜水解液中在相同条件下进行培养；

(3)随着转接的进行逐渐增加离心力，直到菌株发酵性能达到稳定。

本发明人利用离心条件下细胞密度分布差异的原理实现了具有高含油率的轻细胞筛选。这种简单高效方法的应用不仅极大提高了油脂酵母菌株筛选的效率也降低筛选操作的难度。

【附图说明】

图1离心筛选过程曲线；

图2亲本菌株和筛选菌株在15％水解液中摇瓶发酵比较；

图3亲本菌株和筛选菌株在20％水解液中3L罐发酵比较；

图4亲本菌株和筛选菌株在30％固含量同步糖化共发酵中5L 罐发酵比较。

【具体实施方式】

以下提供本发明一种离心筛选具有高含油率油脂酵母菌株的方法及其应用的具体实施方式。

实施例1菌株筛选