[发明专利]一种适用于谷氨酸棒杆菌的增强型表达载体

说明书

本发明公开了一种在谷氨酸棒杆菌表达菌株Corynebacterium glutamicum CGMCC1.15647的增强型表达载体，用于外源蛋白表达。其特征在于：将内源双顺反子元件引入到穿梭载体pXMJ19的多克隆位点之前，得到含有增强型Ptac启动子的谷氨酸棒杆菌表达载体pGX19，该载体能够显著提高外源蛋白GFP、SUMO‑NT‑proBNP、VHH的表达能力。

技术领域

本发明属于基因工程和生物技术领域，具体涉及一种适用于谷氨酸棒杆菌的增强型表达载体。

背景技术

谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)是一种兼性厌氧的革兰氏阳性工业微生物，广泛用于一些有机酸的合成^[1]。因具有无内毒素、抗逆性强、蛋白酶水平较低等优势，近年来谷氨酸棒杆菌也正逐渐被开发用于外源重组蛋白的表达^[2]。

目前能够用于谷氨酸棒杆菌重组蛋白表达的载体较少，常用的有pXMJ19、pEC-XK99E等载体，这些载体大部分仍是基于经典的大肠杆菌Ptac或者Ptrc启动子来表达外源蛋白。尽管近年来也有一些内源启动子以及合成启动子的筛选及应用研究，但总体来看强度高于Ptac启动子的很少，并且基本也都是非诱导型启动子。一些内源诱导型启动子，如对数末期自诱导的Pcg3141以及碳代谢诱导的PmalE1和Pgit1等^[3 4]，综合本底控制、表达强度以及诱导幅度等方面来看往往无法有效替代Ptac启动子。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述的技术缺陷，提出了本发明。

因此，作为本发明其中一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供一种适用于谷氨酸棒杆菌的增强型表达载体。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种适用于谷氨酸棒杆菌的增强型表达载体，其包括，蛋白表达载体，其核苷酸序列包括源基因序列和SD序列。

作为本发明所述适用于谷氨酸棒杆菌的增强型表达载体的优选方案：所述源基因序列包括谷氨酸棒杆菌NCgl2319基因编码序列ATG下游的碱基及5'UTR序列。

作为本发明所述适用于谷氨酸棒杆菌的增强型表达载体的优选方案：所述5'UTR序列长度为30bp或91bp，所述ATG下游的碱基序列长度为59bp。

作为本发明所述适用于谷氨酸棒杆菌的增强型表达载体的优选方案：所述5'UTR序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示，所述ATG下游的碱基序列如SEQ ID NO:3所示。

作为本发明所述适用于谷氨酸棒杆菌的增强型表达载体的优选方案：所述5'UTR序列如SEQ ID NO:1，所述ATG下游的碱基序列如SEQ ID NO:3所示。

作为本发明所述适用于谷氨酸棒杆菌的增强型表达载体的优选方案：所述源基因序列如SEQ ID NO:4所示。

作为本发明所述适用于谷氨酸棒杆菌的增强型表达载体的优选方案：所述SD序列如SEQ ID NO:5所示。

作为本发明所述适用于谷氨酸棒杆菌的增强型表达载体的优选方案：包括所述序列的互补序列。

作为本发明所述适用于谷氨酸棒杆菌的增强型表达载体的优选方案：所述载体用于谷氨酸棒杆菌外源蛋白的表达。

作为本发明所述适用于谷氨酸棒杆菌的增强型表达载体的优选方案：所述载体用于谷氨酸棒杆菌SUMO-NT-proBNP、VHH和EGFP增强绿色荧光蛋白的表达。