[发明专利]一种检测乳品中维生素B9含量的试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种检测乳品中维生素B9含量的试剂盒及其制备方法，方法包括：S1.制备菌悬液包被微孔板：将乳杆菌菌种复苏后，经多次离心去上清后，向离心后产物中加入冷冻干燥保护剂来制备菌悬液，将菌悬液加入到微孔板微孔中，经真空冷冻干燥实现微孔中菌悬液包被；S2.制备维生素B9标准品；S3.制备维生素B9测定培养基：本发明的检测试剂盒法只需处理样品、制备培养基和标准品孵育就可进行检测，检测周期缩短。通过冷冻保护剂及真空干燥降低了试剂盒中的菌种损失，提高维生素B9检测结果的准确性，并且试剂盒配备各浓度标准品，降低了实验误差，本发明检测试剂盒稳定、重复高、回收率高。

技术领域

本发明涉及食品检测领域，尤其涉及一种检测乳品中维生素B9含量的试剂盒及其制备方法。

背景技术

维生素B9(folic acid)，是一种水溶性维生素。由蝶呤啶、对氨基苯甲酸和L-谷氨酸组成的化合物，也叫蝶酰谷氨酸(pteroylglutamic acid，PGA)，它是B族维生素的一种，人体本身不能合成。1941年，是米切尔(H.K.Mitchell，1941)从菠菜叶中提取纯化并被命名为维生B9。研究表明，维生素B9缺乏易引起习惯性流产、胎儿畸形、无脑儿、死胎、早产、胚胎停育等非正常妊娠的产生。同时也与新生儿白血病等癌症，以及儿童智力低下有关。而摄入过量维生素B9会产出毒副作用，如神经受损、发育缓慢、降低食欲等，偶可见过敏反应。

由于维生素B9是目前很多食品中添加的重要的营养添加剂，因此维生素B9也越来越受到人们的重视，其相关研究领域正逐渐拓宽，因此食品中维生素B9浓度的检测会更加受到关注，其检测技术也会不断更新与发展。目前生物体、食品中维生素B9的测定多采用微生物法、比色法、同位素放射免疫法或色谱法、色-质联用法，但这些方法对于维生素B9的检测都有一定的局限性。

放射免疫法可用于检测和评价维生素B9的营养状况但不适用于检测单谷氨酸维生素B9衍生混合物。从定量检测的角度来讲，难以得到准确的维生素B9质量分数值。比色法一般用来测定原料维生素B9、纯酸制品或药品制剂中的维生素B9质量分数。气相色谱-质谱检测主要用于检测血清或红细胞中的维生素B9，但对检出限有一定的要求。微生物法是国际和国内普遍采用的方法，中国食品安全国家标准GB5009.211—2014也将生物法作为维生素B9检测的首选方法。是利用了微生物对某些维生素的特殊依赖性，通过观察微生物的生长繁殖速度来间接测定维生素的含量，同时微生物法具有较高的灵敏度，检测准确度高，先期投人少、检测成本低、见效快的优点但此法存在分析周期长，实验步骤稍烦琐的问题，传统微生物法先需将微生物孵育24h然后进行针刺接种后孵育24h，再处理样品、制备培养基和标准品，孵育24-48h，方可进行结果检测，检测周期5-6天。而且影响微生物法测定维生素B9的因素也较多，使用的营养缺陷型微生物，菌株活力存在差异均匀状态不好活力稳定性差并且在实验过程中使用的玻璃器具、样品称量、稀释的准确度、环境设施、检测结果受样品中所含抗维生素B9药物或抗生素成分等都会影响测定结果。甚至出现微生物为了适应不利环境易发生变异或重组，直接导致错误的结果。

因此，现有技术还有待进一步发展。

发明内容

针对上述技术问题，本发明实施例提供了一种检测乳品中维生素B9含量的试剂盒及其制备方法，以解决现有检测方法简单准确地检测乳品中维生素B9含量的问题。

本发明试剂盒制作过程如下：

1、含冻干菌的酶标板:Costar板，包被物：维生素B9试剂盒所用的菌种是鼠李糖乳杆菌ATCC 7469菌株。菌悬液制备：

(1)番茄汁制备：将番茄去皮后用料理机打碎搅匀，纱布过滤，取干净的滤液备用。

(2)冷冻干燥保护剂配制：0.07g脱脂奶粉+1.2g蔗糖+0.1g谷氨酸钠(味精)+加无菌水至10mL，无菌过滤器过滤后用于稀释菌液。