[发明专利]微藻共栖细菌分离培养基、分离方法以及影响微藻生长的关键细菌高通量筛选方法

说明书

本发明涉及微藻共栖细菌分离领域，具体而言，涉及微藻共栖细菌分离培养基、分离方法以及影响微藻生长的关键细菌高通量筛选方法。一方面，本发明提供一种微藻共栖细菌分离培养基，基于常用海洋细菌分离培养基—Zobell 2216E海洋肉汤细菌培养基进行改良，提供一种可实现增加微藻藻际共栖细菌可培养细菌种类的培养基，为筛选影响微藻生长关键细菌提供丰富的菌种资源。另一方面，本发明提出一种高通量快速筛选显著促藻或抑藻生长细菌的方法，能在短时间内发现对微藻生长有关键影响的细菌。

技术领域

本发明涉及微藻共栖细菌分离领域，具体而言，涉及微藻共栖细菌分离培养基、分离方法以及影响微藻生长的关键细菌高通量筛选方法。

背景技术

自然水环境以及微藻的应用培养过程中，藻类与细菌间存在密切关系，部分细菌对藻类生长具有关键影响。1972年，微藻生物学家Bell和Mitchell提出藻际环境(Phycosphere)的概念(BellMitchell,1972)。与植物根际微生物对植物生长影响相类似，藻际也常栖息着特殊类群的细菌，对微藻的生长及生理形态起着重要调节作用。在海洋生态原位研究以及实验室藻菌共培养研究中，发现部分藻际细菌对微藻生长具有显著的促进或抑制作用，细菌与微藻的相互作用覆盖所有可能的共生形式(Ramanan et al.,2016)，细菌是微藻应用与科学研究中不可忽略的因素。快速发现影响微藻生长的关键细菌以及藻菌互作关系，不仅可在微藻应用中识别藻类“益生细菌”或“病害细菌”从而提高微藻生物量产率获得直接的经济效益，并且有利于联合利用藻菌关系在环境治理，开发新型生物活性物质和生物资源等方面发挥作用。

发现与筛选影响微藻生长的关键细菌整体分为两部分：一是藻际细菌的分离培养；二是从分离得到的纯培养菌株中筛选对微藻生长起关键作用的细菌。海洋细菌分离培养广泛采用Zobell 2216E培养基，其中碳源氮源的蛋白胨、酵母膏用量较大，营养物质较为单一，适合快速繁殖的海洋细菌分离。而微藻藻际环境微生物类群及代谢类型众多，常规Zobell 2216E培养基分离得到藻际细菌过少，给藻际关键细菌的筛选带来困难。

目前筛选对微藻生长有关键影响的细菌方法主要采用三角烧瓶接种微藻和细菌的纯培养物进行共培养，定期取样检测微藻的生物量的方法来判断细菌对微藻的生长影响。由于藻际细菌种类繁多，使得该方法的人力物力需求量大，筛选效率低。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于建立一套联合藻际细菌高效分离培养基、分离方法及关键细菌高通量筛选的方法。

一方面，本发明提供一种微藻共栖细菌分离培养基，基于常用海洋细菌分离培养基—Zobell 2216E海洋肉汤细菌培养基进行改良，提供一种可实现增加微藻藻际共栖细菌可培养细菌种类的培养基，为筛选影响微藻生长关键细菌提供丰富的菌种资源。

另一方面，本发明提出一种高通量快速筛选显著促藻或抑藻生长细菌的方法，能在短时间内发现对微藻生长有关键影响的细菌。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种微藻共栖细菌分离培养基，以溶剂的体积计，包括以下组分：蛋白胨2.5±0.2g/L，酵母提取物0.5±0.05g/L，柠檬酸铁0.005±0.0005g/L，甲胺盐酸盐1±0.01g/L，f/2培养基母液1±0.2mL/L；

所述溶剂为人工海水或其类似物。

其中，人工海水的类似物是指只要用于培养藻类并使之按正常状态存在的盐类混合溶液均可。

进一步地，所述微藻共栖细菌分离培养基为固体培养基，所述培养基还包括琼脂15±0.01g/L。

本发明中提供的微藻共栖细菌分离培养基，除了f/2培养基外，其他组分搅拌均匀后121℃，高压灭菌15-30分种。冷却至60℃左右时，添加f/2培养基。