[发明专利]胰酶的制备方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，公开了一种胰酶的制备方法，其步骤为胰脏解冻，用含0.1~2%病毒灭活剂的75%乙醇浸泡1~6小时，灭活病毒，沥干清洗，预处理的胰脏磨浆后加入磷酸三钠以及低浓度有机溶剂，加钙盐激活提取；分离过滤除内毒素等杂质；沉淀；干燥、粉碎得到产品。本发明的含过氧乙酸的75%乙醇胰脏预处理工艺能够快速渗透动物组织，同时在提取过程中加入磷酸盐、钙盐激活剂，形成磷酸钙，能够除去内毒素，更加有效达到病毒灭活目的，工艺简洁容易操作，制备出的胰酶酶活力、收率不受影响，过氧乙酸残留符合要求，极大增强胰酶药物的安全性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种胰酶的制备方法。

背景技术

胰酶系各国药典收载的助消化药，是从动物胰脏中提取的多种酶的混合物，主要成分为胰蛋白酶、胰脂肪酶和胰淀粉酶。胰酶主要用于消化不良，食欲不振及肝、胰腺疾病引起的消化障碍，同时也适用于先天性胰功能不全、腹部手术和外伤胰腺切除导致的胰功能不全。此外，胰酶中含有多种活性物质，可以作为基础原料从中提取多种生化药品，如胰激肽酶原，弹性蛋白酶，门冬酰胺酶，糜蛋白酶，羧肽酶等，此外，胰酶还被广泛用于细胞培养以生产治疗用生物制品如单抗、细胞因子等，具有重大的工业价值。

由于胰酶来源于动物猪的提取物，其原料中存在病毒污染的风险，比如目前流行的非洲猪瘟病毒。FDA、CFDA、EMA等各国法规中均有明确规定，原料药的制备工艺必须进行病毒灭活和病毒安全评价。2006年，FDA出版Guidance for Industry on ExocrinePancreatic Insufficiency Drug Products，其中对胰酶产品的病毒安全性作出如下描述（1）制造商需要对其进行完整的病毒风险评估（2）按照ICH Q5A的要求验证生产工艺的病毒去除/灭活能力。

而现有技术中，胰酶的生产过程包括：胰脏磨浆、激活、低浓度有机溶剂提取、沉淀丙酮脱脂、烘干，由于制造工艺的限制，胰酶生产中的低浓度有机溶剂提取、丙酮脱脂和烘干条件很难灭活一些理化抵抗力较高的非脂包膜病毒如PPV（猪细小病毒）、PCV（猪圆环病毒）和HEV（戊型肝炎病毒），使得以胰酶作为API、细胞培养原料大大增加了病毒污染的风险。而传统的病毒灭活方法如强碱、高温加热、辐照均会对酶活产生较大的影响。

在专利“一种胰酶的制备方法（CN 108795920 A）”中，公开了用过氧化氢对猪胰浆进行充分搅拌处理，然后加入触媒分解的过氧化氢。上述用过氧化氢处理的方法中，由于处理过程中胰脏已经磨浆部分胰酶激活释放，过氧化氢对胰酶酶活性具有较大影响，同时该专利所用过氧化氢病毒灭活效果、能力范围具有一定的局限。

在专利“在生产胰酶制剂过程中减少或灭活病毒和微生物内容物的方法（CN107849552 A）”中，公开了单纯采用过氧乙酸预先处理猪胰腺，然后清洗去掉残留的过氧乙酸，并从经处理的腺体组织中提取胰酶。上述用过氧乙酸处理的方法中，虽然已经将胰脏切至2~5英寸细条，由于病毒是寄生于细胞内部，该专利所述的方法只能灭活腺体组织表面的微生物，对于细胞内部的病毒灭活效果十分有限，具有一定的缺陷，而且工艺中灭火病毒没有进行去除步骤，对产品有安全风险。

专利US 2011/0268844 A1中公开了用4000、5000或6000巴的超高压处理5分钟处理胰酶制剂以灭活病毒。该方法的缺陷是高压处理对某些病毒的灭活作用是不确定的，而且，超高压设备成本昂贵，生产费用高，在生产实践中基本是不可取的。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种病毒灭活效果好的胰酶制备方法，。