[发明专利]一种快速检测呼吸道合胞病毒的含内参双重等温核酸扩增方法

权利要求书

1.适用于等温核酸扩增技术检测呼吸道合胞病毒的引物探针组合，其特征在于，含有一对特异性引物对、一条靶探针和一条内参探针，所述特异性引物对的核苷酸序列如SEQID NO.1-2所示，所述靶探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述内参探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.权利要求1所述引物探针组合在制备快速检测呼吸道合胞病毒的试剂盒中的应用。

3.含有权利要求1所述引物探针组合的快速检测呼吸道合胞病毒的试剂盒。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，含有等温核酸扩增体系如下：

Tris缓冲液 0~60mM

醋酸钾 50~150mM

醋酸镁 5~30mM

二硫苏糖醇 1~10mM

聚乙二醇 1.5%~7.8%（w/v）

ATP 1~5mM

dNTPs 0.1~0.4mM

磷酸肌酸 20~100μg/U

单链结合蛋白 500~1000 ng/μL

重组酶 50~400 ng/μL

UvsY蛋白 50~200 ng/μL

DNA聚合酶 30~150 ng/μL

核酸外切酶 30~200ng/μL

逆转录酶 40-200U

靶探针 50~150nM

内参探针 50~150nM

正向引物 300~600nM

反向引物 300~600nM。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，靶探针和内参探针分别标记荧光色不同的荧光基团，所述荧光基团包括FAM、HEX、ROX、TET、JOE、CY3、CY5、TAMRA、VIC。

6.如权利要求4-5任一所述的试剂盒，其特征在于，还含有非人类基因组序列的重组DNA做为竞争性内参DNA，该竞争性内参DNA核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，所述试剂盒在工作时，在等温核酸扩增体系中加入样品RNA和内参DNA，混合均匀后进行等温核酸扩增检测，扩增检测温度为39-42℃，扩增检测时间为15-30min。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，混合均匀后进行等温核酸扩增检测，扩增检测温度为39℃，扩增检测时间为30min。

8.一种非疾病诊断目的的快速检测呼吸道合胞病毒的含内参双重等温核酸扩增方法，其特征在于，以权利要求1所述引物探针组合对待测样品模板进行等温核酸扩增检测，所述待测样品模板为待测样品RNA和内参DNA。