[发明专利]一种人体口腔黏膜模型及其制备方法

权利要求书

1.一种人体口腔黏膜模型，其特征在于，包括自下而上排列的基底层、固有层和上皮层，所述固有层包括口腔成纤维细胞和生物支架材料，所述上皮层包括口腔上皮细胞。

2.根据权利要求1所述的人体口腔黏膜模型，其特征在于，所述基底层包括支撑膜，所述支撑膜所使用的材料是尼龙膜、硅胶膜、橡胶膜或合成高分子材料膜。

3.根据权利要求1所述的人体口腔黏膜模型，其特征在于，所述口腔成纤维细胞为可向成纤维细胞分化的干细胞或口腔组织分离培养的原代细胞或商业化的永生口腔成纤维细胞；所述生物支架材料的来源为胶原蛋白、细胞外基质复合物、透明质酸、多糖、硫酸软骨素、聚乳酸、聚羟基乙酸、聚乳酸和聚羟基乙酸的共聚物中的一种或两者以上混合物；所述口腔上皮细胞包括口腔角质细胞，其来源为可向角质细胞分化的干细胞或口腔组织分离培养的原代细胞或商业化的永生口腔角质细胞。

4.根据权利要求1所述的人体口腔黏膜模型，其特征在于，所述成纤维细胞复合于生物支架材料内部。

5.一种人体口腔黏膜模型的制备方法，其特征在于，包括如下步骤:

(1)口腔上皮细胞和成纤维细胞的培养；

(2)基底层的配置：取DMEM培养基、牛血清、生物支架材料混合，调节pH值至pH7.0-pH7.6后，置于支撑膜上，固化；

(3)固有层的配置：取DMEM培养基、牛血清、生物支架材料混合，调节pH值至pH7.0-pH7.4后，加入成纤维细胞，置于所述基底层之上，固化之后，加入成纤维培养基培养；

(4)上皮层的配置：取上皮细胞平铺于所述固有层，孵育，加入上皮培养基培养；

(5)全层口腔黏膜的形成和成熟：将上皮培养基舍弃，进行气液界面培养。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述上皮层的配置中，上皮细胞的添加量为5×10⁵-5×10⁷个/mL。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述固有层的配置中，成纤维细胞的添加量为1×10⁵-1×10⁷个/mL。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，上皮层和固有层的配置中上皮和成纤维细胞培养基包括以下含量的各个组分：

9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述全层口腔黏膜的成熟中，所述气液界面培养的培养基包括以下含量的各个组分：