[发明专利]一种高质量那屈肝素钙的制备方法

说明书

本发明涉及生物医药领域，具体说是一种高质量那屈肝素钙的制备方法。该制备方法使用肝素钠为原料，通过降解、还原、乙醇沉淀、弱阴离子交换层析分级并转钙、过滤沉淀脱水得到高质量那曲肝素钙，与现有技术相比，其分子量分布控制更精准，产品抗Xa因子/抗Ⅱa因子效价比更高，操作更简便，收率更高，适于工业化生产。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体说是一种高质量那屈肝素钙的制备方法。

背景技术

那屈肝素钙是一种低分子肝素钙盐，一般是通过对猪肠粘膜来源的肝素进行亚硝酸裂解后分级，选择性的去除大部分分子量小于2000 Da的糖链而获得。那屈肝素钙由一系列复杂寡糖组成，非还原端主要由2-O-硫-α-L-艾杜糖醛酸组成，还原端主要由 6-O-硫-2,5-脱水-D-甘露醇组成，其重均分子量应为3600～5000，抗Xa因子活性为95 IU/mg～130IU/mg，抗Xa因子效价与抗IIa因子效价比为2.5～4.0。那屈肝素钙临床上可以用于预防静脉血栓栓塞性疾病，治疗已形成的深静脉血栓，在血液透析中预防体外循环中的血凝块形成。

目前国内多以化学法降解得到低分子肝素粗品，其分子量分布从几百到一万不等，因此需采用有效分离方法进行纯化。现有的酒精分级沉淀（CN 106986954 A）、超滤膜分离（CN 104072638 A、CN 104804110 A）、分子筛等控制分子量方法中，酒精分级沉淀技术落后，超滤膜分离损失大量收率，难以分离出分子量分布范围狭窄的片段，分子筛效率低，传统阴离子交换层析也只是起到钙转型（CN 104072639 A），而未能分离得到符合那屈肝素钙分子量分布的片段。CN104163878 A提供的方法的肝素钠除杂步骤难以保证肝素钠质量，且还使用毒性大的氯化钡，造成产品存在安全性的风险，且增加了环保压力。CN 103275246A、CN 103382232 A和CN 103408676 A的方法工序较为复杂、操作繁琐，同时产品的抗Xa/抗IIa比值整体偏低，仍需要进一步提高，分子量分布中小于2000Da组分比例偏高，影响那屈肝素钙的整体品质。

发明内容

本发明要解决的问题是提供一种高质量那屈肝素钙的制备方法，该制备方法使用肝素钠为原料，通过降解、还原、乙醇沉淀、弱阴离子交换层析分级并转钙、过滤沉淀脱水得到高质量那曲肝素钙，与现有技术相比，其分子量分布控制更精准，产品抗 Xa 因子/抗Ⅱa因子效价比更高，操作更简便，收率更高，适于工业化生产。

为解决上述问题，采取以下技术方案：

本发明的高质量那屈肝素钙的制备方法的特点是包括以下步骤：

第一步，肝素钠的裂解：用纯水将肝素钠固体原料制成质量浓度为9-11%的肝素溶液，用盐酸溶液调pH值至2.5-3.0；向肝素溶液中滴加质量浓度为35%-40%的亚硝酸钠溶液，亚硝酸钠与肝素钠的固体质量比为（28-32g）:1000g，控制温度在23-25℃，搅拌反应1.5-2.5h，再用氧化钙调pH值至8.5-9.0终止裂解反应；

第二步，裂解液的还原：向裂解液中加入硼氢化钠，硼氢化钠加入量与初始肝素钠的固体质量比为（10-15g）:1000g，控制温度在30-40℃，反应2-4h后降温至20℃以下；用盐酸调整pH值至2.5-3.0，搅拌反应15-20min后，再用氢氧化钠调整pH值至6.5-7.0，将该溶液流过紫外灯照射管，以220-254nm波长照射20-30min；

第三步，乙醇沉淀：向第二步结束后的料液中边搅拌边加入相当于1.5-2倍料液体积的95%乙醇，搅拌15-20min后静置12-18h，然后倒去上清液；用95%乙醇洗涤沉淀2-3次，静置去除乙醇上清，得到固态的晶体颗粒沉淀；