[发明专利]一种抗体纳米磁珠纯化口蹄疫表位蛋白抗原的方法

说明书

本发明提供一种抗体纳米磁珠纯化口蹄疫表位蛋白抗原的方法，包括如下步骤：步骤一：优化抗体磁珠的结合环境；步骤二：加入结合促进剂能够更好地促进口蹄疫表位蛋白抗原和抗体的结合，通过上述抗体磁珠充分捕获抗原；步骤三：加入WB洗涤液能够充分地去掉抗原‑抗体磁珠结合物A表面的非特异性结合的杂质；步骤四：加入EB2洗脱液目的是解离抗体磁珠捕获的抗原；步骤五：加入NB中和液，使得抗原溶液达到中性，避免较低的pH会对抗原造成破坏，影响抗原特性。本发明的纳米磁珠表面添加的功能团能够一步完成与抗体的共价连接，使得抗体牢固地结合在磁珠表面，保证了抗体磁珠捕获抗原的能力，充分提高了效率及减少成本。

技术领域

本发明是一种抗体纳米磁珠纯化口蹄疫表位蛋白抗原的方法，属于抗原纯化技术领域。

背景技术

纳米磁珠因其具有比表面积大、吸附能力强、易于自动化、操作快速，提取高效等优势越来越受到广泛的应用，比如在核酸提取、细胞筛选、靶向药物等。抗原在抗体研究、免疫治疗及疾病防治中起到了不可或缺的作用，常用的分离柱法因其所需的操作时间长、获得的抗原浓度低及得率少等不足而造成生产成本高、浪费资源等缺点。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明目的是提供一种抗体纳米磁珠纯化口蹄疫表位蛋白抗原的方法，以解决上述背景技术中提出的问题，本发明的纳米磁珠抗纯化抗原的纯度高，使得抗体捕获抗原的能力提升3-10倍。

为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：一种抗体纳米磁珠纯化口蹄疫表位蛋白抗原的方法，包括如下步骤：

步骤一：将10μL混匀后的抗体纳米磁珠放入1.5mL离心管中，再加入200μL BB结合液(Binding Buffer结合液)混合均匀，将上述离心管放到磁力架上进行吸附抗体磁珠，吸附1min，移出并弃掉上清液，保留底部抗体磁珠；该步骤是为了优化抗体磁珠的结合环境。

步骤二：将200μL BB结合液，100μL结合促进剂和20μL口蹄疫表位蛋白抗原(OPS1抗原)加入到步骤一中得到抗体磁珠的离心管中，室温结合30-60min，把离心管放到磁力架上吸附1min，移出并弃掉上清，保留离心管底部的抗原-抗体磁珠结合物A，该步骤加入结合促进剂能够更好地促进口蹄疫表位蛋白抗原和抗体的结合，通过上述抗体磁珠充分捕获口蹄疫表位蛋白抗原；

步骤三：加入200μL WB洗涤液(Washing Buffer洗涤液)洗涤步骤二中得到的抗原-抗体磁珠结合物A，充分混合5min，将离心管放到磁力架上吸附1min，移出并弃掉上清，保留离心管底部物质；再向上述离心管中加入200μL WB洗涤液进行洗涤，充分混合5min，将离心管放到磁力架上反应1min，移出并弃掉上清，得到离心管底部的抗原-抗体磁珠结合物B；该步骤加入WB洗涤液能够充分地去掉抗原-抗体磁珠结合物A表面的非特异性结合的杂质。

步骤四：将40μL EB2洗脱液(Elution Buffer洗脱液)加入到步骤三中获得抗原-抗体磁珠结合物B的离心管中，室温条件下混合10min，将离心管放到磁力架上反应2min，得到纯化富集后的口蹄疫表位蛋白抗原上清液；该步骤加入EB2洗脱液目的是解离抗体磁珠捕获的口蹄疫表位蛋白抗原。

步骤五：将步骤四得到的纯化富集后的口蹄疫表位蛋白抗原上清液转移至新的离心管中，加入10μL NB中和液(Neutral Buffer中和液)，混合并低温保存，得到纯化富集后的口蹄疫表位蛋白抗原溶液，该步骤中加入NB中和液，使得口蹄疫表位蛋白抗原溶液达到中性，避免较低的pH会对口蹄疫表位蛋白抗原造成破坏，影响口蹄疫表位蛋白抗原特性。

进一步的，步骤一中的BB结合液包括中性盐溶液和低浓度的变性剂。

进一步的，所述中性盐溶液为0.2-2mol/L磷酸盐缓冲液、10-50mmol/L Tris-HCl缓冲液或0.1-0.5mol/L NaCl溶液。