[发明专利]一种比率型荧光探针的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种比率型荧光探针的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

S1，包埋红量子点的二氧化硅纳米颗粒的制备：

将曲拉通X-100和正己醇依次加入到环己烷中，混合均匀之后加入红量子点，于5～40℃搅拌5～30min分钟，形成微乳液体系；随后向所述微乳液体系中加入正硅酸乙酯和25％～28％的氨水溶液，室温反应24h，反应结束后向该反应体系加入36ml的异丙醇进行破乳，得到絮状沉淀物，将该絮状沉淀物离心、醇洗多次，直至最后一次的离心上清液无荧光信号为止，冻干后得到包埋红量子点的二氧化硅纳米颗粒；

其中，所述曲拉通X-100的质量用量以所述红量子点的体积计为3.5～4.0g/1ml；所述正己醇的体积用量以红量子点的体积计为4～5μl/1μl；所述环己烷的体积用量以红量子点体积计为15～20μl/1μl；所述正硅酸乙酯的体积用量以红量子点的体积计为0.1～0.2μl/1μl；所述氨水的质量用量以红量子点的体积计为4～5g/1ml；所述异丙醇的体积用量以所述反应体系的体积计为3～4ml/1ml；

S2，制备氨基化修饰的包埋红量子点的二氧化硅纳米颗粒：

将所述包埋红量子点的二氧化硅纳米颗粒均匀分散在无水乙醇中，向该反应液快速加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，使用蛇形冷凝管油浴加热至85～95℃回流；反应完成后，使其自然冷却至室温，离心分离该产物，之后将其分散于超纯水中，得到氨基化修饰的包埋红量子点的二氧化硅纳米颗粒分散液；

其中，所述无水乙醇的质量用量以包埋红量子点的二氧化硅纳米颗粒质量计为8～12ml/1mg；所述3-氨丙基三乙氧基硅烷的体积用量以包埋红量子点的二氧化硅纳米颗粒质量计为50～75μl/1mg；

S3，蓝量子点溶液的制备：

将赖氨酸以及柠檬酸溶于超纯水中，固体全部溶解后转移至聚四氟乙烯反应釜中于150～250℃下反应4～6h，之后利用透析袋将反应釜中的溶液在超纯水中透析20～50h，透析后得到的蓝量子点储存在4℃冰箱中；

其中，所述赖氨酸和柠檬酸的物质的量分别为4～6mmol和9～11mmo；所述透析袋的截留分子量为500Da；所述超纯水中的用量足以将所述赖氨酸和柠檬酸全部溶解；

S4，比率型荧光探针的制备：

称取1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺分别溶解于超纯水中，之后与步骤S3制备的蓝量子点溶液混合，黑暗条件下反应搅拌27～33min；随后向上述反应液中加入步骤S2制备的氨基化修饰的包埋红量子点的二氧化硅纳米颗粒分散液，并在室温下反应12h；反应结束后，离心分离该产物，得到所述比率型荧光探针；

其中，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的质量用量以所述蓝量子点溶液的体积计为30mg/1ml；所述N-羟基琥珀酰亚胺的质量用量以所述蓝量子点溶液的体积计为70mg/1ml。

2.根据权利要求1所述的比率型荧光探针的制备方法，其特征在于：所述红量子点为硒化镉，所述蓝量子点为碳点。

3.根据权利要求1所述的比率型荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤S1中，于20℃搅拌5～30min分钟。

4.根据权利要求1所述的比率型荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤S2中，使用蛇形冷凝管油浴加热至90℃回流。

5.根据权利要求1所述的比率型荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤S3中，固体全部溶解后转移至聚四氟乙烯反应釜中于200℃下反应5h，之后利用透析袋将反应釜中的溶液在超纯水中透析36h；所述赖氨酸和柠檬酸的物质的量分别为5mmol和10mmol。

6.根据权利要求1所述的比率型荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤S4中，在黑暗条件下反应搅拌30min。

7.根据权利要求1所述的比率型荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤S4中所述蓝量子点的体积用量以所述氨基化修饰的包埋红量子点的二氧化硅纳米分散液的体积计为6ml/1ml。