[发明专利]一种重金属镉离子的荧光定量快速检测试纸条及其制备方法和应用

说明书

一种重金属镉离子的荧光定量快速检测试纸条及其制备方法和应用，属于食品检测技术领域。本发明PVC底板两端分别设有样品垫和吸水垫；在PVC底板中部设有硝酸纤维素膜检测层，在硝酸纤维素膜检测层与样品垫之间设有荧光微球标记垫；所述荧光微球标记垫一端与样品垫互相叠加，另一端与硝酸纤维素膜检测层互相叠加；所述硝酸纤维素膜检测层上依次设有质控线和检测线。本发明对重金属镉离子检测速度快，全过程只需要5min即可，可以实施大批量样品的快速检测；本发明灵敏度高，大米样本检测限为10ng/mL；本发明检测过程简单，直接上样检测，样品前处理简单，无需经过专业培训，易于推广，不需要仪器，适合现场检测。

技术领域

本发明涉及一种重金属镉离子的荧光定量快速检测试纸条及其制备方法和应用，属于食品检测技术领域。

背景技术

镉的毒性很大，可在人体内积蓄，主要积蓄在肾脏，会引起泌尿系统的功能变化。镉主要来源如电镀、采矿、冶炼、燃料、电池和化学工业等排放的废水；废旧电池中镉的含量较高，水果和蔬菜尤其是蘑菇及奶制品和谷物中也有少量存在。镉能够干扰骨中钙，若长期摄入微量镉，会使骨骼严重软化，干扰人和生物体内的酶系统，引起胃脏功能失调。镉中毒又称为痛痛病，它可以通过与酶类巯基的结合或替代作用，置换出细胞内的酶类金属，降低机体抗氧化酶的活性，使机体清除自由基的能力下降，引起氧化损伤；镉进入细胞内，可使细胞内钙稳态失衡，干扰细胞内钙代谢；能引起DNA单链断裂，损害DNA修复系统，进而导致细胞凋亡。镉的绝大部分形态均可被植物利用及蓄积，且通过食物链富集作用危害人类健康，主要包括肾脏、肝脏和肺部的累积毒性，被国际癌症研究机构确定为可导致人类和实验动物肺癌和前列腺癌的确认致癌物。

建立食品样品中镉快速准确的检测方法势在必行。目前，传统的重金属检测方法概括起来主要包括以下几种：原子吸收光谱法（AAS）、原子发射光谱法（AES）、电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）、原子荧光光谱法（AFS）、紫外可见分光光度法（UV-VIS）、阳极溶出伏安法（ASV）等。但这些方法专业性要求高、分析时间长、分析价格昂贵，不利于推广和现场检测。而免疫分析方法与以上分析方法相比具有特异性强、操作简便、仪器化程度和分析成本低的优点。荧光定量检测试纸条可以进行定量或半定量的测定，具有相当高的灵敏度，能满足不同样品的快速检测要求。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种重金属镉离子荧光定量检测试纸条及其制备方法与应用，可大规模地对粮食及其加工产品残留重金属镉进行快速、方便、准确的检测。

本发明的技术方案，一种重金属镉离子的荧光定量快速检测试纸条，包括样品垫、荧光微球标记垫、检测线、质控线、吸水垫、硝酸纤维素膜检测层和PVC底板；

所述PVC底板两端分别设有样品垫和吸水垫；在PVC底板中部设有硝酸纤维素膜检测层，在硝酸纤维素膜检测层与样品垫之间设有荧光微球标记垫；所述荧光微球标记垫一端与样品垫互相叠加，另一端与硝酸纤维素膜检测层互相叠加；所述硝酸纤维素膜检测层上依次设有质控线和检测线。

所述重金属镉离子的荧光定量快速检测试纸条的制备方法，步骤如下：

（1）荧光微球储备液的制备：取0.05M pH为8的硼酸缓冲液400μL于2mL离心管中，加入100μL-120μL荧光微球，漩涡震荡，混匀备用；

（2）荧光微球镉离子标记抗体的制备：取10mg/mL的EDC溶液 20μL，室温震荡活化15min，2000rpm 10℃离心10min，弃上清，对固相物用0.5mL 0.05M pH=8 硼酸缓冲液复溶，超声分散；加入重金属镉离子抗体，使抗体终浓度为30-50μg/mL，置于250rpm摇床上2h；加入封闭液，即最终浓度为1%-2%BSA，置于摇床封闭1-2h，2000rpm离心10min，弃上清，固相物用0.5mL硼酸缓冲液复溶，洗涤离心后，再用偶联储存缓冲溶液复溶，超声分散后得到荧光标记的重金属镉离子抗体，4℃保存；