[发明专利]一种检测PIK3CA基因H1047R位点的特异性引物对、探针及试剂盒在审
| 申请号： | 201910197018.8 | 申请日： | 2019-03-15 |
| 公开（公告）号： | CN109811041A | 公开（公告）日： | 2019-05-28 |
| 发明（设计）人： | 陈凌波;车健为;王晓岗;朱志辉 | 申请（专利权）人： | 广州漫瑞生物信息技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;陈征 |
| 地址： | 510663 广东省广州市高新技术产业开*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 特异性引物 探针 位点 核苷酸序列 试剂盒 种检测 检测结果 突变频率 位点设计 游离核酸 数字PCR 灵敏度 检测 引物 突变 血液 应用 | ||
1.一种用于检测PIK3CA基因H1047R位点的特异性引物对，所述特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示。
2.与权利要求1所述的特异性引物对配合使用的探针组合，所述探针组合含有2条探针，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3-4所示。
3.如权利要求2所述的探针组合，SEQ ID NO.3所示探针的5’标记VIC，3’标记MGB-NFQ，SEQ ID NO.4所示探针的5’标记FAM，3’标记MGB-NFQ。
4.含有权利要求1所述特异性引物对和/或权利要求2所述探针组合的试剂盒。
5.含有权利要求1所述特异性引物对和/或权利要求2所述探针组合的检测试剂。
6.权利要求1所述的特异性引物对和权利要求2-3任一所述的探针组合或权利要求4所述的试剂盒或权利要求5所述的检测试剂在检测PIK3CA基因H1047R位点中的应用。
7.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，其工作程序为：
(1)提取待测样品的基因组DNA；
(2)以提取的基因组DNA为模板，利用权利要求1所述的特异性引物对和权利要求2所述的探针组合，进行数字PCR扩增反应；
(3)根据荧光信号给出的拷贝数判定结果。
8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，其工作程序中步骤(2)的数字PCR扩增反应的程序为：95℃预变性10min；94℃变性20s，56℃退火及延伸45s，共40个循环；98℃固化微滴10min。
9.一种检测血液中游离核酸中PIK3CA基因H1047R位点的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)提取待测血液样品的基因组DNA；
(2)以提取的基因组DNA为模板，利用权利要求1所述的特异性引物对和权利要求2所述的探针组合，进行数字PCR扩增反应；
(3)根据荧光信号给出的拷贝数判定结果。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤(2)中进行数字PCR扩增反应的程序为：95℃预变性10min；94℃变性20s，56℃退火及延伸45s，共40个循环；98℃固化微滴10min。
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