[发明专利]一种具有免疫调节活性瓜蒌子多糖的制备方法

说明书

本发明公开一种瓜蒌子多糖最佳提取及其分离纯化工艺，包括：瓜蒌子多糖的最优提取工艺条件为液料比10~50:1(g:ml)，提取温度为50~90℃，提取功率为250~800W，提取时间为10~35min，在此条件下多糖最佳提取率为0.94%~2.49%。采用酶Sevage法对瓜蒌子多糖提取液进行脱蛋白处理，DEAE‑52纤维素层析柱纯化分离。此法制备的5个瓜蒌子多糖由Man、Rib、Rha、GluA、GalA、Glu、Gal、Xyl、Arab和Fuc等单糖不同种类不同比例组成，其瓜蒌子单体多糖的分子量范围为364~3235616 Da，STKMP‑4和STKMP‑5具备免疫调节活性。

技术领域

本发明涉及一种瓜蒌子多糖最佳提取工艺及其分离纯化工艺和免疫活性。

背景技术

瓜蒌子，又被称作瓜蒌仁、栝楼仁、栝楼子等，是成熟的葫芦类栝楼或双边栝楼的已干燥的种子，主要具有温润肺部、止咳化痰、滋润肠道、治疗便秘等，入药常用来治疗咳嗽痰多、肠道燥热便秘，也被人叫做“全瓜蒌”，还具有改善心脑血管疾病、化痰、消炎等作用。《雷公炮炙论》最早记载：“皮、子、茎、根, 其效各别。”但其具体效用未记载。《名医别录》分别记载了其功效: “栝楼根, 无毒。主除肠胃中痼热, 八疸, 身面黄, 唇干舌燥, 短气,通脉, 止小便利。实, 治胸痹,悦泽人面。茎叶, 治中热伤暑。”古代方剂中的栝楼有时指根，有时指果，所载栝楼桂枝汤中的栝楼指根，而该书中的栝楼薤白白酒汤及栝楼薤白半夏汤中的栝楼指果实。瓜蒌子甘寒清润, 化痰泻热, 为治热痰燥痰之要药。用于热痰内结,咳嗽喘急, 痰黄稠黏。与半夏为伍, 如《济生方》中治肺热痰咳、胸膈塞满的半夏丸。《丹溪心法》中治酒痰咳嗽。由于其质润多脂, 滑肠通便, 还可用于肠燥便秘, 古方单用或与火麻仁、郁李仁同用，还能化痰消肿。

瓜蒌子为化学成分主要含有精氨酸、亮氨酸、谷氨酸及天冬氨酸等17种氨基酸和钾、钠、钙、镁、铜、锌、铁及锰等无机元素及少量的挥发油、饱和脂肪酸等。果实中普遍含有多糖，植物多糖是一种具有多种生理功能和开发价值的活性多糖。许多植物多糖具有提高免疫力、抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、抗感染、抗溃疡等多种生理功能。

目前，对有关瓜蒌子多糖类成分的研究报道较少。于丹等人对瓜蒌种子的多糖类成分的总糖含量、糖醛酸含量进行研究，测得瓜蒌子多糖含量为64.85%、糖醛酸含量为25.05%，是一种酸性杂多糖。熊利芝等人采用超声辅助响应面法提取栝楼皮多糖，得到最优工艺为提取时间60.26 min，超声功率为204.39 W，液料比20:1( ml/g) ，提取温度为72.45℃，提取率为6.06%，超声功率、提取温度对栝楼皮多糖的提取率影响达到极显著水平。刘敦华等将沙蒿籽胶多糖经0.5mol/L KOH (含20mmol/L 的NaBH₄) 处理分级，得到2个级分AG1和AG2。A G1 经DEAE Sepharose CL-6B柱层析分级，得到AG11和AG12共2个组分。

张岫秀等人采用脏器指数评价、巨噬细胞吞噬能力测定和淋巴细胞增殖能力3 种方法考察瓜蒌多糖对免疫抑制小鼠免疫能力的影响，发现其能显著提高免疫抑制小鼠巨噬细胞的吞噬能力，表明瓜蒌多糖对小鼠的非特异性免疫功能具有促进作用。瓜蒌多糖具有良好的免疫增强活性，但其免疫调节机制尚不清楚。

多糖结构极其复杂，不能用小分子化合物的方法来评价。本专利研究瓜蒌子多糖，旨在为瓜蒌的实际应用提供理论基础。

发明内容

本专利采用微波提取法提取瓜蒌子多糖，通过响应面实验设计优化提取工艺，以期提高瓜蒌子多糖的提取率，进行多糖的单糖组成、分子量和免疫调节活性的测定，为进一步开发瓜蒌资源奠定理论基础。

一种如权利要求1所述采用响应面优化微波辅助具有免疫活性的瓜蒌子多糖及其纯化分离工艺，其特征在于按如下步骤进行：