[发明专利]一种比伐芦定的分离纯化方法

说明书

本发明提供了一种比伐芦定的分离纯化方法。本发明的比伐芦定的分离纯化方法包括以下步骤：1)将比伐芦定粗品溶解，过滤，得到比伐芦定溶液；2)将步骤1)的比伐芦定溶液上样到装有反相填料的制备柱中进行纯化；采用酸性流动相对目标产物进行洗脱，分段收集目的峰值溶液，混合各段收集的溶液为合并组份液，得到纯化后的比伐芦定。本发明通过一步纯化、仅需一种填料即可得到高纯度比伐芦定，纯化过程简便易行，可用于规模化生产，降低了生产成本，提高了生产效率。

技术领域

本发明属于药物合成技术领域，涉及一种比伐芦定的分离纯化方法，尤其涉及一种比伐芦定的一步高效分离纯化方法。

背景技术

比伐芦定(Bivalirudin，也叫做比伐卢定)是一种直接凝血酶抑制剂(DTI)，源于水蛭素衍生物，是一种由28种氨基酸化学合成的多肽，其结构式如下：D-Phe-L-Pro-L-Arg-L-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-L-Asn-Gly-L-Asp-L-Phe-L-Glu-L-Glu-L-Ile-L-Pro-L-Glu-L-Glu-L-Tyr-L-Leu。

比伐芦定是一种有效的、高选择性的可逆抑制剂，不仅能抑制游离型和结合型的凝血酶，还能抑制由凝血酶介导的血小板激活和聚集。比伐芦定的药效快、半衰期短，在机体内不与血浆蛋白和红细胞结合，对肝素诱导的血小板减少症和肝素诱导的血栓形成-血小板减少综合症(HIT/HITTS)不存在风险，此外，治疗中，不需要结合抗凝血酶等辅助因子，也不用激活血小板，这些特点使比伐芦定成为一个理想的肝素替代品。

2000年12月，美国Medicines公司开发的该药品的注射用剂型在美国上市，商品名为Angiomax，通用名为Bivalirudin，中文名为比伐芦定，上市剂型为冻干粉针剂，规格为250mg/支。2005年1～2月，Medicines公司在欧洲的子公司Nycomed的Angiox(Bivalirudin在欧洲的商品名)在奥地利、丹麦。芬兰、德国、瑞士和英国上市，用于行经皮冠脉干预病人，其上市的规格为250mg/瓶的无菌冻干粉，Angiomax用于静脉内注射和滴注。

目前，制备比伐芦定的方法已有文献报道，可以采用多肽固相合成以及液相合成法制备比伐芦定粗肽(按照国家药品标准YBH02852011中有关物质检测方法，杂质含量超过标准中规定的比伐芦定粗品，可以定义为比伐芦定粗肽)，但针对比伐芦定粗肽的纯化，仅有为数不多的文献报道。

CN101475631A公开了一种比伐卢定的液相合成方法，该方法仅仅描述了采用HPLC方法纯化比伐芦定初肽及冷冻干燥的工艺，未见详细的纯化工艺和冻干工艺的描述，且产品纯度仅能达到98.5％，按照国家药品标准YBH02852011中有关物质不得超过1.5％的规定，制备的比伐芦定原料药已经接近杂质限度，在有效期2年内，长期储存很容易造成有关物质检查项不合格。

CN102264757B公开了一种制备比伐卢定的方法，该发明提供了一种纯化比伐芦定初肽的方法，采用制备级HPLC在C18反相固定相上纯化所述粗制的肽。第一步，采用醋酸铵/水/乙腈梯度洗脱纯化所述粗制的肽，然后第二步，采用三氟乙酸/水/乙腈梯度洗脱。但是，该发明未说明具体的纯化的条件，无法重现其实验结果。