[发明专利]ATP生物荧光lgCB-lgIB标曲法检测抗菌不锈钢抗真菌性能的方法

说明书

本发明涉及一种抗菌不锈钢抗真菌性能检测方法，检测步骤包括：样品制备及前处理；设备选型及试剂、培养基配制；菌种保藏、活化及菌悬液制备；美蓝染色后菌悬液活菌含量C_B血球板计数及接种菌液C_B标定；lgC_B‑相对荧光强度对数值lgI_B标曲建立；样品接种、培养及洗脱回收；回收液I_B测定及其活菌含量C_B和T_B推算；抗菌率R或抗菌活性值A计算；结果评价；其特别之处在于：应用ATP荧光光度计对以R或A表征的不锈钢抗真菌性能进行精准定量测试。本发明规定洗脱回收接触0h及培养24h/48h后对照样品和抗菌样品，测定回收液I_B并以lgI_B表征和计算R或A；提供结果评价依据。本发明研发的抗菌不锈钢抗真菌性能检测的ATP生物荧光lgC_B‑lgI_B标曲法，将以先进检测技术支撑产品质量提升。

技术领域

本发明涉及抗菌不锈钢的抗真菌性能测试方法，具体是一种应用ATP荧光光度计对以抗菌率R或抗菌活性值A表征的抗菌不锈钢抗真菌性能进行精准定量检测的ATP生物荧光lgC_B-lgI_B标准曲线法，属于不锈钢抗菌功能检测技术领域。

背景技术

不锈钢与人类生活息息相关，在工业和民生等诸多方面应用广泛；近年来，受科技进步和消费需求的牵引，作为新型结构/功能一体化材料的涂层型抗菌不锈钢、表面改性型抗菌不锈钢、复合型抗菌不锈钢、合金型抗菌不锈钢应运而生。据权威机构预测，70％以上医疗设备、厨房卫浴、公用设施等领域的不锈钢市场可由抗菌不锈钢替代；伴随着抗菌技术在不锈钢产业的应用和普及，相关标准化要求逐渐提上日程。

目前，国内外抗菌材料性能检测技术体系主要针对细菌和真菌，各国抗真菌效果测试方法原理多基于对白色念珠菌进行分离培养的平板计数法，鲜有涉及霉菌者；其中适用白色念珠菌测试的一是日本工业标准提出的浸渍定量试验方法；二是源自美国纺织业的抑菌环法；三是国际通用的振荡烧瓶法；四是源于美国纺织企业的滴下法；五是日本企业针对光催化型抗菌制品研发的盖玻片法。虽然我国已颁布实施《消毒与灭菌效果的评价方法与标准》、GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》和QB/T 2738-2012《日化产品抗菌抑菌效果的评价方法》等相关标准，但其规定的测试周期在48小时～72小时之间，时间及经济成本高。另外，多年来国际防霉效果评价技术体系基本源自美标、日标和欧标，国外所涉标准方法主要包括土埋培养法、琼脂平板法、湿室培养法等；我国基于平皿培养法和悬挂法，先后制定GB/T 1741-2007《漆膜耐霉菌性测定法》、GB/T 24346-2009《纺织品防霉性能的评价》、FZ/T 60030-2009《家用纺织品防霉性能测试方法》、GB/T 24128-2009《塑料防霉性能试验方法》、QB/T 4199-2011《皮革防霉性能测试方法》、HG/T 4301-2012《橡胶防霉性能测试方法》、LY/T 2230-2013《人造板防霉性能评价》等标准；但有关不锈钢抗真菌性能检测方法标准尚属空白。由于霉菌孢子生长过程中形成的菌丝体无法准确计数，只能进行定性判定，无法定量测试；且因霉菌生长周期较长，培养时间至少2周～4周，导致测试周期较长，时间及经济成本高。无论针对白色念珠菌还是霉菌，现有标准方法的实验过程繁琐，技术难度较高；相关操作受人为因素影响大，使得测试误差大，缺乏可比性。近年来，在国际细菌检测技术领域ATP荧光分析法发展日益成熟，与传统平皿法相比检测结果相关性为98％，准确度高且可实现快速检测。国外抗菌材料性能检测技术研究领域针对当前定量化、快速化和简易化发展趋势，已借鉴ATP荧光分析原理制定ISO 20743:2007-2013《Textiles-Determination of antibacterial activity of textile products(纺织品-抗菌整理纺织品的抗细菌性能测定)》和ISO 13629-1:2012《Textiles-Determination of antifungalactivity of textile products.Part1Luminescence(纺织品-抗菌整理纺织品的防霉性能测定)》，规定了以样品接种后ATP含量变化表征抗细/霉菌性能的荧光测定法，但其仅适用于具有吸水性且对照样细/霉菌增长值＞0的纺织材料或微孔材料，在活菌回收方式、试验有效条件等关键技术方面不适用于具有非吸水性硬质表面且对照样真菌增长值＜0的不锈钢、玻璃等材料；同时未提供明确的结果计算公式和测量不确定度评估。另外，该标准方法相关抗菌性能表征参数相对单一，仅涉及抗菌活性值A，而我国则惯用抗菌率R。